MEGAclear™ 转录纯化试剂盒替代方案

前言：
基因编辑就要用到sgRNA，纯化sgRNA最常用的就是ThermoFisher 公司的MEGAclear™ Kit，这个试剂盒不仅价格昂贵，订货周期较长，本人经过试验，筛选到市面某产品可替代，并优化了操作步骤（不同于说明书），如下：

-

图片.png

平均：91.7元/次；

完美替代品：

http://www.aidlab.cn/products-show.asp?anclassid=96&nclassid=62&id=1797
Aidlab为小作坊公司，部分产品还是可行，但职业道德不行，无底线黑竞争对手，广告语令人作吐（世界第一等）。小公司有时候没有售后保障，反正错都是客户的。
平均：7元/次

优化后步骤：

1. 将20ul T7转录产物转移至1.5ml离心管，加入150ul Elution buffer或DEPC Water混匀；

2. 在上述液中加入250ul OD buffer，移液器吹打混匀（不可离心）；

3. 组装过滤柱，并用100ul平衡液（3M NaOH)平衡过滤柱，提高结合性能；

4. 将RNA混合液加入过滤柱，室温，10000g离心1分钟；

5. 加入700ul wash buffer 洗涤，室温12000g离心1分钟；重复一次；

6. 空管离心2分钟去除残余的乙醇；

7. 超净工作台吹干5分钟，然后加入40-60ul Elution buffer或DEPC Water溶解；

产物取出1ul稀释10倍测浓度，剩余进行电泳检测RNA质量完整性及酶切活性。