CTDNA检测提取步骤

BIOG操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、1.5mL 离心管。

2. 取出洗涤液，按以下操作：

a) 洗涤液 A：21mL 加入 9mL 无水乙醇，混匀；42mL 加入 18mL 无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液 B：9mL 加入 21mL 无水乙醇，混匀；18mL 加入 42mL 无水乙醇，混匀。

c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在 37℃溶解，摇匀后使用。

3. 取 1.5mL 离心管，加入 200μL 样本，4μLDNACarrier 混合均匀，加入 300μL 裂解液及 20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴 10 分钟。

4. 加入 1mL 无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 DNA 的提取与后续实验。

5. 将吸附柱放入收集管内，将 760μL 上述溶液转入吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液；

6. 将吸附柱放回收集管内，将剩余 760μL 溶液转移至吸附柱内，重复步骤 5。

7. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内，静置 2 分钟，12,000 rpm 4℃离心 1 分钟，弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 离心管内，加入 30-50 μL 洗脱液，静置 3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心 2 分钟，收集 DNA 溶液。提取的

DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. BIOG裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用

清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。2. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。