瑞禧解析制备步骤--荧光标记外泌体（含荧光标记方向科普）

外泌体(Exosome)是指包含了复杂 RNA和蛋白质的膜性膜泡 (30-150nm)，其直径在30-150nm左右。外泌体的形成过程：细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中而形成外泌体。
外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中，所有培养的细胞类型也均可分泌外泌体。

制备荧光标记外泌体的步骤如下∶
1.取200 ug/ml的C5-马来酰亚-Alexa488(绿色荧光）或C5-马来酰亚-Alexa633(红色荧光)2.5 ul，加入提取好的含60- 100 ug蛋白质的30ul外泌体样品中，以PBS补足至50ul ,不搅拌的情况下于暗室中室温孵育60分钟。
⒉.在孵育时将exosome spin columns ( Invitrogen )试剂盒按照说明书准备好并将粉末树脂于室温下水合15-30分钟。
3.将装有柱子的收集管于离心机水平转子中以750x g离心2分钟，弃收集管，向树脂中加入荧光染料孵育后的外泌体
4.将柱子置于1.5ml微量离心管750x g离心3分钟，多余的染料会被树脂吸附
5.荧光标记后的外泌体缓慢加入1000ul不含酚红的DMEM，于0.22um过滤膜过滤后。分装并储存于负80度备用。

同时外泌体可与相邻细胞和远端组织细胞相互作用，并且涉及许多疾病的发生发展，包括肿瘤等，外泌体还被认为潜在的生物治疗药物的递送载体，但其具体的作用方式与机制目前仍并不十分明确。因此用荧光探针在不影响外泌体大小和功能的情况下，直接或间接标记细胞外囊泡，可在研究中在不影响功能的情况下实现可视化，帮助相关研究的进行。

荧光标记应用广泛，除外泌体，还有那些呢？
小编带你整理（告诉你可以定制呦）：
荧光标记方向广泛，有外泌体、天然活性分子、胆酸、氨基酸、蛋白、配体、多肽、药物、共聚物、脂质体、衍生物、抗体、细胞、酶、凝集素、DNA与RNA核酸、纳米、MOF金属有机框架、微球、细菌、糖类及适配体等等。

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