第二次细胞生物学实验

第二次细胞生物学实验

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前言

细胞膜的渗透性、细胞活性检测

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一、细胞膜的渗透性

1.1. 实验目的

1. 了解细胞质膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度
2. 学会结合已学的理论知识分析现象背后的原因

1.2. 实验原理

将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，促使水分进入细胞，引起溶血。

由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。

1. 高渗溶液:

●比细胞液渗透压高的溶液称高渗溶液:如10%的葡萄糖液或50%葡萄糖液等。

2. 等渗溶液:

●与细胞液渗透压相等的溶液称等渗溶液:如5%的葡萄糖溶液或0.9%的氯化钠溶液。

3. 低渗溶液:

●比细胞液渗透压低的溶液称低渗溶液:如蒸馏水等。

正常红细胞悬浮于等渗的血浆中。若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩。
反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。

低渗溶液会使红细胞溶血，高渗溶液红细胞会因失水而皱缩。

1.3. 实验仪器、材料和试剂

1. 器材：试管和试管架、10 ml移液管。
2. 材料：鸡(或鱼)血细胞
3. 试剂: 0.17 mol/L氯化钠、0.17 mol/L氯化铵、0.17 mol/L硝酸钠、0.12mol/L硫酸钠、 0.17 mol/|醋酸胺、0.12 mol/l草酸铵、 0.32 mol/l葡萄糖、0.32 mol/l甘油、 0.32 mol/l乙醇、蒸馏水。

1.4. 实验方法与步骤

1、鸡(或鱼)血细胞

2、低渗溶液：

●取试管一支，加入5 ml蒸馏水，再加入1m|鱼血稀释液，迅速混匀后，注意观察溶液颜色变化。

●由不透明的红色逐渐澄清,说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血。

3、鸡(或鱼)红细胞的渗透性

●取试管一支，加入0.17 mol/|氯化钠溶液5 ml,再加入1 ml血细胞稀释液，迅速轻轻摇动，注意颜色有无变化?有无溶血现象?为什么?

●取试管-支，加入0.17 mol/|氯化铵溶液5 ml,再加入1 ml血细胞稀释液，迅速轻轻摇动，注意颜色有无变化?有无溶血现象?若发生溶血，记下时间(自加入血细胞稀释液到溶液变成红色透明澄清所需时间)。

●分别在另外7种等渗溶液中进行同样实验。

1.5. 实验结果

将观察到的现象（是否溶血、时间）记录在下表中
最后将10个溶液一起拍照，要求清晰呈现溶血状况
要求文字描述观察到的现象。

等渗溶液	是否溶血	溶血时间
蒸馏水	是	较快，30s左右完全溶血
0.17mol/L氯化钠	否
0.17mol/L氯化铵	是	27min部分溶血，2h后仍有部分没溶血
0.12mo/L硫酸钠	否
0.32mol/L葡萄糖	否
0.17mol/L 醋酸胺	是	5min部分溶血，2h后仍有部分没溶血
0.12 mol/L草酸铵	是	8min部分溶血，2h后仍有部分没溶血
0.32mol/L甘油	是	25min完全溶血
0.32mol/L乙醇	是	较快，10s左右完全溶血

下图从左到右是按上表的等渗溶液的顺序：

其中鸡血细胞在氯化钠、硫酸钠、葡萄糖等渗溶液中不溶

即对于能溶血的等渗溶液，按溶血速度有：

乙醇> 蒸馏水 > 甘油 > 醋酸铵 > 草酸铵 > 氯化铵

其中鸡血细胞在蒸馏水和乙醇中完全溶血，其余都是部分溶。

1.6. 实验分析

对实验结果进行比较并分析红细胞在不同溶液中溶血情况的原因。

细胞膜内外渗透压差异

比如：蒸馏水对红细胞有溶血作用，这可能是因为蒸馏水中没有溶质，与红细胞内部的渗透压差异较大，导致水分进出红细胞，使红细胞涨破。最终导致溶血。

剩下的也同理可推断（主要是依靠细胞膜的渗透性，这也正是本实验要证明的）

二、细胞活性检测

2.1. 实验目的

提供处理后的细胞图片，并指出哪些是死细胞，哪些是活细胞
（蓝色的为死细胞，透明的为活细胞）

2.2. 实验原理

取Hanks溶液处理后，台盼蓝染色15min的细胞进行显微观察，结果如图1所示。图中，呈现蓝色的细胞为死细胞，而透明的细胞为活细胞。在形态上，死细胞呈现圆形，透光性较差，细胞与周围溶液边界不明显;而活细胞为椭圆形，细胞透亮，边界清晰。

2.3. 实验材料

硫酸铜溶液溶液
HanKs 溶液
台盼蓝染色剂
鸡血细胞液

2.4. 实验方法与步骤

分别计算实验组和对照组，活细胞在总细胞中的比例。加硫酸铜溶液的是实验组，加HanKs溶液的是对照组

血细胞计数板构造：

计数室的两种规格：

2.4. 实验结果

结果显示，对照组活细胞的比例为91.27%，CuSO4 处理组活细胞的比例为67.81% (表1)。表明实验组和对照组之间有极显著的差异，即鸡血细胞经过CuSO4处理后，细胞的死亡率增加，CuSO4对细胞造成了损伤。

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总结

人生天地间,忽如远行客。

–2023-10-10 生物技术篇