组氨酸标签序列选择_1. His-tag——历久弥新的6组氨酸标签

1. His-tag——历久弥新的6组氨酸标签

金属螯合亲合层析，又称固定化金属离子亲合层析(Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC)，是近30年发展起来的一种新型分离技术。最早由Paroth等人提出[1]。该方法利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等能和金属离子发生特殊的相互作用的原理，从而对蛋白质加以分离。这些作用包括配价键结合、静电吸附、共价键结合，其中以配价键结合为主，而且这其中又以6组氨酸标签(His-Tag)应用最为广泛。

以His-Tag纯化标签结合金属螯合亲合层析，为重组蛋白质的分离纯化提供了一个有力的工具。由于金属螯合亲合层析具有配体简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点，上样条件可选择范围广，在高盐、一定浓度的变性剂以及去垢剂的条件下，带6His纯化标签的蛋白质都可以和亲合填料特异性结合，逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品最有效的技术之一[2]。

1.1 His-tag是蛋白纯化的首选标签

Susanne Graslund等人[3]在对10,000多个不同蛋白的表达纯化进行总结，认为His-tag是蛋白纯化的首选标签，主要有五方面的因素(表9)。

1.2 His-tag亲和层析填料

His-tag可与多种金属离子发生特殊的相互作用，包括Ca2+、Mg2+、Ni2+、Co2+等，其中以镍离子使用最为广泛。镍琼脂糖凝胶FF的配基是最经典的I