微生物核酸提取的操作步骤

操作步骤 （请自行准备无水乙醇、异丙醇和灭菌 1.5mL 离心管） ：

1. 取出洗涤液，按以下操作：

a) 洗涤液 A：21mL 加入 9mL 无水乙醇；42mL 加入 18mL 无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液 B：18mL 加入 42mL 无水乙醇；36mL 加入 84mL 无水乙醇，混匀。

2. 取 1.5mL 离心管，加入 200μL 血液或其它样本，再加入 180μL 裂解液及 20μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴 10 分钟。

3. 加入 400μL 异丙醇，混合均匀，如有半透明悬浮物，不影响 DNA 的提取与后续实验。

4. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液；

5. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 A 至吸附柱内，静置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

6. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液 B 至吸附柱内，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8. 按每份样本 30μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取 300μL 洗脱液），放置于灭菌 1.5mL 离心管，65℃预热。

9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。

10. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入 30 μL 预热洗脱液，静置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，收集核酸溶液，提取的核酸即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。裂解液如拆封后未使用完毕，应及时旋紧管盖，密闭保存。

2. 单次血液样本用量一般为 200μL，如血液量较多，请使用 BIOG 中量全血核酸提取试剂盒。

3. 为防 RNA 酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无 RNA 酶的容器和无 RNA 酶的超纯水。

4. 提取的 DNA 如暂不使用，应-20℃保存，RNA 应-70℃保存，可适当加入 RNA 保护因子（货号：51090，一般 50μLRNA 溶液加入 2μL）。