2018-09-12 固定的过程和固定剂的性质

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简介

固定是为了保持组织/细胞和活的时候状态一致。通常，组织在被剥夺血液营养物质供应后，会立马进行降解。细胞内细胞器膜破裂释放出的酶、特定物种本身存在的细菌等会导致自溶（autolysis）。一些可溶性的物质必须通过沉淀、共价结合、或者交联到非可溶性的成分中来防止其降解。
需要注意的是，固定剂会对组织造成不同于其在水相的变化，这些变化通常包括，收缩、膨胀、硬化等。例如，10%的福尔马林最开始会导致轻微的膨胀，处理的过程中体积会缩小20%-30%。

固定的种类

可以通过化学、物理的方法实现组织的固定。

物理方法

加热（微生物样本用的多）、微波、冻干（组织化学中应用广泛）

化学方法

将样本进入固定剂中（immersion fixation）|| 小动物器官灌注固定（perfusion fixation）|| 多聚甲醛/四氧化锇 可被用于蒸汽固定/冻干固定组织
一些常用的固定溶液有多种试剂组成，比如，醋酸可用来抵消乙醇造成的皱缩

固定剂的分类和固定的机制

固定是一系列复杂的化学反应组成，目前还没有充分理解。传统的固定剂可分为促凝剂、非促凝剂。促凝剂促进蛋白质形成网状蛋白链，非促凝剂作为添加物和蛋白质形成交联，形成不通透的胶状物。

机制1 ：变性

通常是脱水剂造成，如酒精、丙酮。脱水剂取代组织和细胞中的水，导致蛋白质三维结构的变化。外界水对蛋白质分子内部的疏水区域的压制消失，疏水区域的占地面积增大。亲水区域中的分子通常通过氢键松散结合。水去除后，这些结合也被破坏。蛋白质分子结构的变化导致其溶解性的变化，使得水溶性蛋白溶解度不可逆的降低。

机制2：增加及交联形成

非促凝剂的固定剂和蛋白质及其他的组分发生化学反应，与之结合。这些试剂具有反应活性，可以和各种化学基团结合，导致结合位点电荷变化。从而导致随后染色特性的变化以及改变其解构和溶解性。比如，用甲醛固定的组织很难用伊红染上。因为甲醛和氨基反应形成亚甲基桥，从而不能结合到带负电的分子如伊红。
戊二醛的作用更强 →→用于固定电镜观察样品。
抗原修复 是因为某些固定是可逆的。要保护抗原性时要考虑固定剂