【比较基因组】共线性分析(JCVI)

比较基因组学中,共线性的分析的图无疑是很漂亮的。

共线性分析可以很好地解释进化关系和多倍化事件。上一篇介绍了怎么利用MCScanX来做共线性分析,虽然后面有java的包来支持后续的画图和分析,总觉得不是很适合来调整图片的美观程度。今天主要测试的是Python版McScan(jcvi工具包),这个包很强大,是从MCScanx升级而来的基因组共线性分析软件。

===安装===

conda create -y -c bioconda -c conda-forge -n jcvi jcvi   //为了怕依赖包冲突,新建了一个jcvi的环境

source activate jcvi

pip install git+git://github.com/tanghaibao/jcvi.git

或者 pip install jcvi

然后,安装额外的依赖环境:Kent tools,BEDTOOLS,EMBOSS,LAST,LaTex。

其中,BEDTOOLS, EMBOSS和LAST可以用conda来安装。

conda install -y -n jcvi -c bioconda bedtools emboss last

pip install latex

Kent自己编译一下

wget http://hgdownload.cse.ucsc.edu/admin/jksrc.zip

unzip jksrc.zip

cd kent/src/lib

make

===测试数据===

下载拟南芥和水稻的数据

#A thaliana

wget ftp://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-44/fasta/arabidopsis_thaliana/cdna/Arabidopsis_thaliana.TAIR10.cdna.all.fa.gz

wgetftp://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-44/fasta/arabidopsis_thaliana/pep/Arabidopsis_thaliana.TAIR10.pep.all.fa.gz

wget ftp://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-44/gff3/arabidopsis_thaliana/Arabidopsis_thaliana.TAIR10.44.gff3.gz

#O sativa

wgetftp://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-44/fasta/oryza_sativa/cdna/Oryza_sativa.IRGSP-1.0.cdna.all.fa.gz

wgetftp://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-44/fasta/oryza_sativa/pep/Oryza_sativa.IRGSP-1.0.pep.all.fa.gz

wgetftp://ftp.ensemblgenomes.org/pub/plants/release-44/gff3/oryza_sativa/Oryza_sativa.IRGSP-1.0.44.gff3.gz

# convert gff to bed

python -m jcvi.formats.gff bed --type=mRNA--key=transcript_id Arabidopsis_thaliana.TAIR10.44.gff3.gz > ath.bed

python -m jcvi.formats.gff bed --type=mRNA--key=transcript_id Oryza_sativa.IRGSP-1.0.44.gff3.gz > osa.bed

# deduplication

python -m jcvi.formats.bed uniq ath.bed

python -m jcvi.formats.bed uniq osa.bed

seqkit grep -f <(cut -f 4 ath.uniq.bed )Arabidopsis_thaliana.TAIR10.cdna.all.fa.gz | seqkit seq -i > ath.cds

seqkit grep -f <(cut -f 4 ath.uniq.bed )Arabidopsis_thaliana.TAIR10.pep.all.fa.gz | seqkit seq -i > ath.pep

seqkit grep -f <(cut -f 4 osa.uniq.bed)  Oryza_sativa.IRGSP-1.0.cdna.all.fa.gz| seqkit seq -i  > osa.cds

seqkit grep -f <(cut -f 4 osa.uniq.bed )Oryza_sativa.IRGSP-1.0.pep.all.fa.gz | seqkit seq -i  > osa.pep

mkdir -p cds && cd cds

ln -s ../ath.cds ath.cds

ln -s ../ath.uniq.bed ath.bed

ln -s ../osa.cds osa.cds

ln -s ../osa.uniq.bed osa.bed

# compara

python -m jcvi.compara.catalog ortholog--no_strip_names ath osa

生成的结果文件如下图所示:

pdf里面的点阵信息如下图所示,基本没什么共线性。

换蛋白的试下:

python -m jcvi.compara.catalog ortholog --dbtype prot --no_strip_names ath osa

它生成的文件里除了PDF里面的点阵图之外,还有:

 ath.osa.last: 基于LAST的比对结果

ath.osa.last.filtered: LAST的比对结果过滤串联重复和低分比对

ath.osa.anchors: 高质量的共线性区块

ath.osa.lifted.anchors:增加了额外的锚点,形成最终的共线性区块

用水稻和拟南芥进行了比较之后,发现后面基本上也没啥可以分析了。所以我们换个和拟南芥一个种的例子来看,A.lyrata。

python -m jcvi.compara.catalog ortholog --no_strip_names ath aly

我们可以发现,都作为Arabidopsis属的两个物种,他们之间存在很高的同源性,点阵图也是非常好看的。

并且同源区比例是1:1。

看下别人paper中的效果(2011年的Nature Genetics上A.lyrata):

用JCVI的画图模块实现这种效果,只不过还需要一些其它文件,创建如下三个文件 

seqids: 需要展现哪些序列

layout: 不同物种的在图上的位置

.simple: 从.anchors文件创建的更简化格式

创建simple文件

python -m jcvi.compara.synteny screen --minspan=30 --simple ath.aly.anchors ath.aly.anchors.new

创建seqid文件,非常简单,就是需要展示的scaffold或染色体的编号。

创建layout文件,用于设置绘制的一些选项。

最后运行下面的命令,会得到一个karyotype.pdf

python -m jcvi.graphics.karyotype seqid.txt layout.txt

===测试多个物种的数据===

下载三个物种的数据:

python -m jcvi.apps.fetch phytozome Vvinifera,Ppersica,Tcacao

python -m jcvi.formats.gff bed --type=mRNA --key=Name Vvinifera_145_Genoscope.12X.gene.gff3.gz -o grape.bed

python -m jcvi.formats.gff bed --type=mRNA --key=Name Ppersica_298_v2.1.gene.gff3.gz -o peach.bed

python -m jcvi.formats.gff bed --type=mRNA --key=Name Tcacao_523_v2.1.gene.gff3.gz -o cacao.bed

python -m jcvi.formats.fasta format Vvinifera_145_Genoscope.12X.cds.fa.gz grape.cds

python -m jcvi.formats.fasta format Ppersica_298_v2.1.cds.fa.gz peach.cds

python -m jcvi.formats.fasta format Tcacao_523_v2.1.cds.fa.gz cacao.cds

python -m jcvi.compara.catalog ortholog grape peach --cscore=.99 --no_strip_names

python -m jcvi.compara.catalog ortholog peach cacao --cscore=.99 --no_strip_names

python -m jcvi.compara.synteny screen--minspan=30 --simple grape.peach.anchors  grape.peach.anchors.new

python -m jcvi.compara.synteny screen--minspan=30 --simple peach.cacao.anchors peach.cacao.anchors.new

python -m jcvi.graphics.karyotype seqids layout

我们在来看layout文件。第一列,二列,三列控制的是track的位置。rotation是方向,color是颜色,label是标签。va是vertical alignment。

所以修改配置,是可以控制每个track的位置的。

这样就可以三角性状显示。

然后如果想highlight其中的某个line,可以修改anthor.simple文件:

前面加了r*(r是红色,g是绿色等)。

其中还有一些参数,例如--shadestyle=line(共线性区域是用曲线还是线),font是字体,--diverge是track色系的调整,等等。

总之,一个好看的图要不断的进行调整。

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