科研小兵～提质粒

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之前已经提过好多次质粒，但由于质粒属于低拷贝，提取的浓度过低，无法应用于后续实验操作，导致失败。质粒PAX01拷贝数足够，因此提取相对容易了许多，昨天晚上八点接菌，今日早上八点来看菌液明显不够混浊，十二个小时可能时间不够，等十四个小时后再提。

质粒提取步骤：在含有合适抗生素的培养基中接种目标菌株，于37℃摇床充分震荡培养12~16h。对于高拷贝质粒，取1.5~5ml菌液，于室温，8000 x g离心2min收集菌体，倒尽或吸干培养基。在菌体沉淀中加入250ul Buffer P1，吸打或震荡至彻底悬浮菌体。加入250ul Buffer P2，立即温和颠倒离心管5-10次混匀，室温静置2-4min。加入350ul Buffer P3，立即温和颠倒离心管5-10次充分混匀。于离心机最大转速（≥12,000 x g）离心5-10min，将上清全部小心移入吸附柱，9000 x g离心30sec。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。在吸附柱中加入500ul去蛋白液Buffer DW1，9000 x g离心30sec。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。向吸附柱中加入500ul Wash Solution，9000 x g离心30sec，倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。重复上述步骤一次（向吸附柱中加入500ul Wash Solution，9000 x g离心30sec，倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中)。将空吸附柱和收集管放入离心机，9,000 x g离心1min。在吸附膜中央加入50-100ul Elution Buffer（一般用30ul灭菌ddH2O代替），室温静置1-2min，9,000 x g离心1min。将所得到的质粒DNA溶液置于-20℃保存或用于后续实验操作。

期待今天的实验操作顺利，后续需要测浓度以及凝胶电泳分析看条带图是否正确。