SARS-CoV-2抗体检测的潜在假阳性原因及其解决方案

Potential false‐positive reasons for SARS‐CoV‐2 antibody testing and its solution
根据其来源，SARS-CoV-2抗体检测假阳性的原因可分为内源性因素和外源性因素。详情如下：

1. 内在干扰

1.1 类风湿因子 (RF)

类风湿因子（RF）有五种类型：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白D和免疫球蛋白E（IgE），其中IgM是最常见的类型。RF可能出现在自身免疫性疾病的血液中，例如类风湿性关节炎、传染病，甚至健康人的血液中。 21 , 22 , 23 , 24 在 SARS-CoV-2 抗体检测中，RF 可以非特异性结合固相载体上包被的特异性抗体 Fc 段和标记的抗体 Fc 段，产生非特异性检测信号，造成假积极的。 23 , 25 采用捕获法检测IgM特异性抗体，固相载体包被抗体为抗人μ链抗体。因此 IgM 型 RF 更容易大量与固相结合，导致检测信号和假阳性反应。 26 研究表明，如果 RF > 331IU/ml，IgM 抗体会发出假阳性信号。如果 RF > 981.2IU/ml，IgG 和 IgM 抗体都可以给出假阳性信号。 27 因此，如果标本中的射频含量较高，则必须排除射频引起的假阳性。

在临床试验中，通常可以通过以下措施避免射频干扰： (1) 稀释标本，降低射频浓度。 25 因为 RF 和 IgG Fc 片段是非特异性结合的，RF 稀释可以降低结合亲和力，从而减少假阳性。在急性病原体感染期，IgM急剧上升，这种方法特别有用。(2)更换酶标抗体。包被抗体或/和标记抗体的Fc片段被消化去除，只留下具有特异性结合功能的F(ab') 2 部分用于包被或/和标记，可以避免RF干扰。 27 , 28 (3) 围堵射频。分析前，在样品中加入热变性（63°C，10 min）的动物血（如兔、羊等）IgG，或用IgG包被的固体颗粒吸附检测样品中的RF 29 射频干扰。当仅测量特异性 IgM 抗体时，可添加抗人 IgG 以中和测试样本中的 RF 和 IgG。 30 (4) 向试样中加入一定浓度的尿素。尿素可以解离低亲和力结合的 RF 和 IgG 复合物。ELISA法中RF与抗体的非特异性结合，可用浓度为4 mol/L的尿素解离。当尿素浓度增加到6 mol/L时，可以解离胶体金免疫层析法中RF的非特异性结合。 31 , 32 (5) 测试前使用聚乙二醇 (PEG) 6000 沉淀。 33 与 IgG 形成复合物并干扰免疫测定的 RF 的主要成分被认为是多克隆 IgM 型 RF。这种大分子复合物是与 PEG 6000 一起沉淀的主要成分。由于小分子，单体 RF 沉淀很少。

RF可以在很多人身上检测到，是临床上最常见的内源性干扰物质。因此，当SARS-CoV-2抗体检测呈阳性时，首先要排除RF的影响。可以通过某些措施减少RF的非特异性结合以减少假阳性，包括稀释测试样品、使用F(ab') 2 包被或标记的测试试剂、阻断和阻断RF。

1.2 嗜异性抗体 (HA)

1.3 人抗动物抗体（HAAA）

1.4 溶菌酶

1.5 补体

1.6 交叉抗原

2. 外来干扰

2.1 标本不完全凝固

2.2 试剂盒系统优化不足