如何使用试剂盒鉴定和鉴别乳酸杆菌属？

乳酸杆菌鉴定试剂盒

HiLacto™ Identification Kit

概况

KB020包含了2种传统生化试验和10种糖发酵试验，通过微生物代谢反应导致培养基颜色变化。试验需要3%的H2O2溶液，需使用者自己提供。

用途

鉴定和鉴别乳酸杆菌属

样本类型

食品、乳制品、临床样品。

样本收集和处理

请依据相关指南

局限

1）该试剂盒不能直接用于样本。微生物需先分离纯化。

2）糖发酵试验中，某些菌可能反应较弱，此时应延长孵育至48小时

3）有矛盾结果时，可能与菌种突变和分离培养用培养基有关。

4）菌种鉴定表已遵循相关实验室相关参考标准。

结果判定

依据结果诠释表。以下试验在24-48小时孵育期（在或不在5-10%CO2条件）结束后，在第2孔添加3%的H2O2溶液如下试剂：

触酶试验：第2孔

用接种环在孔内培养基生长表面刮擦取样，然后蘸到含3%H2O2溶液的干净小试管中。

接种环表面冒泡为阳性反应。

没有冒泡为阴性反应。

使用说明

可在乳杆菌MRS琼脂（M641）或胰酪大豆胨琼脂（M290）上挑取一个菌落，接种在５ml脑心浸膏肉汤中，35-37℃或者35-37℃，5%~10%CO2（根据需要）培养6-18小时，直到在620nm处，接种液浊度≥0.1OD或0.5McFarland标准。

无菌打开试剂盒，撕掉封条。每孔接种50μl上述菌液。也可用接种环划线。35℃-37℃（5%~10%CO2或非5%~10%CO2）孵育24-48小时。

12种生化反应明细

鉴定的乳酸杆菌

酸面乳杆菌（L. acidifarinae）

胃窦乳杆菌（L. antri）

短乳杆菌（L. brevis）

布赫内氏乳杆菌（L. buchneri）

人阴道乳杆菌（L. colehominis）

丘状菌落乳杆菌（L. collinoides）

食二酸乳杆菌（L. diolivorans）

榴莲乳杆菌（L. durianis）

费伦托什乳杆菌（L. ferintoshensis）

发酵乳杆菌（L. fermentum）

噬果糖乳杆菌（L. fructivorans）

谷物乳杆菌（L. frumenti）

胃乳杆菌（L. gastricus）

黑氏乳杆菌（L. hammesii）

希氏乳杆菌（L. hilgardii）

果囊乳杆菌（L. ingluviei）

高加索酸奶乳杆菌（L. kefiri）

昆仑乳杆菌（L. kunkeei）

林氏乳杆菌（L. lindneri）

坏发酵乳杆菌（L. malefermentans）

粘膜乳杆菌（L. mucosae）

口乳杆菌（L. oris）

面包乳杆菌（L. panis）

类布赫内氏乳杆菌（L. parabuchneri）

类丘状乳杆菌（L. paracollinoides）

类高加索酸奶粒乳杆菌（L. parakefiri）

桥乳杆菌（L. pontis）

路氏乳杆菌（L. reuteri）

罗西氏乳杆菌（L. rossiae）

旧金山乳杆菌（L. sanfranciscensis）

斯比氏乳杆菌（L. spicheri）

斯瓦比乳杆菌（L. suebicus）

嗜热乳杆菌（L. thermotolerans）

牛痘乳杆菌（L. vaccinostercus）

阴道乳杆菌（L. vaginalis）

老面乳杆菌（L. zymae）

储存条件及保质期

2℃-8℃；12个月

引用文献

GayathriDevaraja., et al. “Screening of ProbioticPotential of Lactobacillus Strains Isolated using Homemade Curd fromMysore District, Karnataka”. ECMicrobiology . 2018, 14(7): 374-383.

KavitaSharma, et al. Selection and Evaluation of Probiotic and FunctionalCharacteristics of Autochthonous Lactic Acid Bacteria Isolated from FermentedWheat Flour Dough Babroo. Probiotics and Antimicrobial Proteins.  (2018). https://doi.org/10.1007/s12602-018-9466-z

Kumara,S.S.,et al. Characterization of Novel Lactobacillus fermentum from Curd Samplesof Indigenous Cows from Malnad Region, Karnataka, for their Aflatoxin B1Binding and Probiotic Properties. Probiotics & Antimicro. Prot.(2018).