细菌/真菌DNA提取注意事项

产品特点

◎提取DNA纯度高，无抑制剂，A260/A280为1.7-1.9；

◎产率高，同样的样本量提取的DNA更多；

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒；

◎细胞壁较厚的革兰氏阳性菌和真菌也有较好的提取效果。

产品介绍

BIOG DNAFungi & Bacteria Kit是专门用于从各种细菌和真菌样本中提取基因组DNA的试剂盒。BIOG DNAFungi & Bacteria Kit采用特别配制的菌体裂解酶裂解真菌和细菌，采用复合消化液消化菌体中的蛋白质，使菌体DNA更容易释放出来，因而本试剂盒菌体DNA提取产率较高。BIOG DNAFungi & Bacteria Kitt采用了最新的离子膜技术并反复优化了洗脱液配方，提取得到的菌体DNA纯度更高，最大限度地去除了蛋白、脂类等杂质污染，可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。 

操作步骤：

1. 请自行准备：无水乙醇、异丙醇、PBS及1.5mL离心管。

2. 取出洗涤液，按终浓度70%比例加入无水乙醇，如7.8mL加入18.2mL无水乙醇，充分混匀。

3. 菌体处理：将收集的细菌或真菌12,000 rpm离心2分钟，弃上清，加入200μLPBS，振荡混匀，12,000 rpm离心2分钟，彻底弃上清。

4. 加入100μL裂解液Ⅰ，强烈Vortex，直到沉淀完全悬浮，无明显块状沉淀，再加入裂解酶10μL，充分混匀，室温放置20分钟。

5. 加入200 μL 裂解液Ⅱ，20μL复合消化液，充分混匀，65℃孵育20分钟。

6. 加入150μL异丙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。

7. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液全部转入吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，静置2分钟，12,000 rpm离心1 分钟，弃收集管内废液。

9. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 离心1 分钟，弃收集管内废液。同时，按每份样本40μL 取洗脱液（如10份提取样本，即取400μL洗脱液），放置于灭菌1.5mL离心管，65℃预热。

10. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 离心2 分钟，离去残留的洗涤液。

11. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入上述预热的40 μL洗脱液，静置2分钟，12,000 rpm 离心2分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时请就医。

2.洗涤液最好现用现配，按需计算用量后配制。加入乙醇后的洗涤液如使用不完，2-8℃密封保存不超过1周。

3. 细菌量建议不高于107。