CTAB法--DNA提取

实验步骤

1.称取0.1g左右的植物组织，放入2ml离心管，加入600ul的DNA提取缓冲液
（Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3）。
2.研磨彻底，65℃水浴50min，中间每隔15分钟颠倒混匀一次。
3.加入600ul的氯仿/异戊醇24:1，颠倒混匀。
4.14000rpm离心10min，取上清液500ul左右到新的1.5ml离心管。
5.加入等体积的异丙醇（约500ul），混匀后放置-20摄氏度，30min。
6.14000rpm，4℃，10min。
7.小心倒掉异丙醇（注意沉淀），加入1ml 75%的乙醇，颠倒混匀，洗涤DNA。
8.14000rpm，离心5min，倒掉75%乙醇。
9.重复步骤8。
10.将DNA沉淀放置于超净台，15min，彻底去除多余的乙醇。
11.加入50-200ul的ddH2O，测浓度，跑电泳，鉴定DNA的质量。
12.置于-20℃，保存。

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试剂配制

1.Buffer①（200ml）：D-山梨醇-12.754g，Tris pH8.-2 2.42g，EDTANa2-0.3722g。
2.Buffer②（200ml）：Tris（pH7.5）)4.8456g，EDTANa2-3.722g，NaCl-23.492g，CTAB-4g。
3.Buffer③（200ml）：N-月桂酸肌氨酸钠盐-10g。
4.Na2HSO3。

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DNA提取缓冲液配制

Buffer①--13.75ml + Buffer②--31.25 ml+ Buffer③--5ml+NaHSO3--0.19g = 50ml DNA提取缓冲液。