霍乱弧菌的分离与鉴定

霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一，属于国际检疫传染病，曾在世界上引起多次大流行。霍乱弧菌是该病的病原体，学名V.cholera，属弧菌科，是一种革兰氏阴性菌。

人类在自然情况下是霍乱弧菌的主要易感者，通过污染的水源或饮食物经口传染。在一定条件下，霍乱弧菌进入小肠后，依靠鞭毛的运动，穿过粘膜表面的粘液层，可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上，在肠粘膜表面迅速繁殖，经过短暂的潜伏期后便急骤发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺，也不侵入血流，仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素，此毒素作用于不粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌，从而患者出现上吐下泻，泻出物呈“米泔水样”并含大量弧菌，此为本病典型的特征。

霍乱弧菌分离与鉴定方法

1. 生化鉴定

生化鉴定前，先分离霍乱弧菌，通常情况下，霍乱弧菌在TCBS培养基上典型霍乱弧菌菌落为黄色，扁平，真径 2-3 mm；副溶血弧菌菌落呈圆形，边缘整齐、湿润、稍混浊、半透明，多数具尖心、斗笠状，蓝绿色菌落，直径2-4 mm。

但传统TCBS培养基上的其他的蔗糖发酵菌会影响TCBS琼脂上弧菌的鉴定，影响检测结果。或选用显色培养基分离，缔一生物为您推荐HiMedia公司（国际知名微生物公司）的HiCrome弧菌显色培养基（货号：MV1682），在该培养基上细菌β-半乳糖苷酶和培养基中所包含底物发生反应，使霍乱弧菌呈现紫色菌落；同时可以分离出副溶血性弧菌，呈现蓝绿色菌落，可初步确认副溶血性弧菌和霍乱弧菌的存在。

可选用HiMedia公司HiBio-IDTM弧菌生化鉴定卡（货号：KB007）， 12种生化反应：

特点：

△操作简单，省时省力

△省心，所需试剂都包含在试剂盒中

△高效率，一次孵育即出结果

△实验结果准确、可靠

2.血清凝集法

根据弧菌O抗原不同，分成Ⅵ个血清群，第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群A、B、C三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型：含AC者为原型（又称稻叶型），含AB者为异型（又称小川型），A、B、C均有者称中间型（彦岛型）。

1992年10月在印度东南部又发现了一个引起霍乱流行的新血清型菌株（0139），它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同，但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集，抗01群的抗血清对0139菌株无保护性免疫。在水中的存活时间较01群霍乱弧菌长，因而有可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。

3.核酸扩增法

核酸扩增两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列。

由霍乱弧菌引起的霍乱疾病，对人类健康危害很大，有效的检测鉴定出霍乱弧菌对人类健康有着重要意义。