烟草瞬时表达

  1. 接农杆菌5ml,28℃培养摇床,摇至OD600=1.0。
  2. 8000rpm,5min离心收菌(只要能够收集到菌体就可以),配置一定量的含有0.2mM AS(乙酰丁香酮),10mM MgCl2,pH5.6(KOH调pH)的10mM MES 溶液,洗菌体,重悬,离心。
  3. 重复步骤2。
  4. 重悬后的菌液室温放置3-5小时,用1ml 注射器,去掉针头,注射本氏烟草的叶片下表皮(一般一个基因一株烟草的多片叶子)。
  5. 注射完成后,擦干净多余的菌液,防止各基因之间的互相感染。
  6. 最后将农杆菌侵染了的烟草放置培养箱2天, 共聚焦显微镜观察荧光。

以上几种溶液的母液浓度:10mM的MES用KOH调至pH5.6;1M MgCl2;0.1M的乙酰丁香酮。(一般配置10ml的重悬液:分别加10ml,100μL,20μL上述母液)

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