实验室的环境和设施
法医DNA实验室对环境和设施严格控制,实行分区域管理和定期清洁制度,是避免DNA污染的有效手段。
实验室分区
由于法医DNA检验的高灵敏性,为了防止检验过程中的交叉污染,法医DNA实验室应建立实验室分区和授权进入制度,各区域间的通风、排气系统不得混用,无关人员不得进入实验区域,不同区域的实验设备及器械不得混用。
DNA实验室的分区域管理,能够保证在不同的实验区域内完成不同的检验,按照DNA含量由少到多的顺序,实现检材和样本的单方向流动。DNA实验室必须设置案件受理和检材保管区、样品DNA提取区、DNA扩增区、DNA检测区,有条件的实验室还应设置初检区、结果分析区、准备区等,其中DNA扩增区和检测区还应设置缓冲区,供技术人员更换工作服。对于微量DNA的检验,如接触DNA等,由于检材含有的DNA量少,更存在污染的危险,要设置专门的DNA提取区域。
PCR污染是法医DNA实验室的特点,也是实验室污染防范的重点。在PCR扩增产物或等位基因标准对照物中含有高浓度的DNA目的片段,极少的量就会被检测到,实验室一旦发生此类污染,将很难清除,后果严重。对实验室实行分区管理,严格按要求操作,能够有效地预防污染发生,其中重点要对DNA检测区进行严格管理。含有扩增产物或对照物的离心管只能在DNA检测区打开,不允许带出该区域;处理检测区的废物时要封装严密;技术人员进出该区域要更换工作服。
实验室清洁
做好实验室的清洁工作是防止DNA实验室内发生交叉污染的有效途径。造成DNA交叉污染的原因多种多样,主要是物证检材之间或比对样本与物证检材之间的相互污染。DNA交叉污染的方式可以是直接接触造成,也可以是通过一定的载体使外源DNA发生转移造成,使DNA检验结果错误;前者容易发现和预防,后者则较难发现和预防,这要求实验室要做到定期清洁和消毒。
实验室的清洁范围包括对工作台面、仪器设备表面、重复使用的工具或器皿等的清洁。工作台面重点部位包括实验室受理检材的柜台、DNA提取工作台、吸取DNA的超净台和检材存储柜等都是容易接触并遗留DNA的区域;仪器设备主要有离心机的转头、提取DNA用的加热块、扩增仪的样品槽、移液器杆的吸孔、遗传分析仪的加样槽等;重复使用的工具或器皿主要有剪取检材样本使用的剪刀及镊子、配制试剂所用的试剂瓶等。
实验室清洁主要是采用擦拭清洗的办法,先用新鲜配制的10%漂白液(7mM次氯酸钠溶液)将需要清理物体的表面反复擦拭,再用75%乙醇擦洗以去除残留物,可以有效清除它们表面附着的各种污染物,条件允许的情况下定时进行紫外灯照射消毒[5]。实验室除要建立定期清洁制度外,一旦发现在检验过程中有可能发生DNA污染时,要及时清理和清洁。
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