如何选择热启动Taq酶

热启动Taq酶应用较广，与普通Taq酶相比，热启动Taq酶能有效避免一些非特异扩增和引物二聚体的形成，能有效提高目标基因的扩增成功率。特别在基因检测领域，热启动Taq酶已被确定为行业强制性标准，普通Taq酶不得使用。以上可见，热启动Taq酶应用非常广泛。目前国内市场上销售的热启动Taq酶的品牌很多，但真正高质量的热启动Taq酶并不多，国外品牌有ABI 、Bioline等，国内品牌有Biog、probegene等。面对这么多的热启动Taq酶产品，我们应如何选择？

[if !supportLists]一、[endif]选择扩增效率高的热启动Taq酶。PCR扩增效率与Taq酶的性能密切相关，好的Taq酶反应体系经优化后，扩增效率在95%以上，起始模板量扩增范围宽。在目标基因含量较低时能够获得满意的扩增，在模板量较高时，也不易中毒，指数扩增期较长。而性能较差的Taq酶，即使反应体系经多次优化，扩增效率仍达不到90%，扩增曲线“S”型不明显，斜率较小，曲线低平。模板量较低时扩增不出来，较高时扩增效果也不理想。因而，选择高扩增效率的Taq酶对PCR、qPCR能否成功是否重要。我们实验室对国内常用的几家公司的热启动Taq酶曾经进行过比较，将GAPDH质粒5倍梯度稀释，将qPCR结果做成标准曲线，结果ABI和BIOG热启动Taq酶扩增效率都在95%以上，每反应体积能够检测的最低量可达2pg，而某国际知名品牌T的热启动Taq酶的扩增效率只有90%，在模板量为2pg时无扩增曲线。

选择酶动力强的热启动Taq酶。Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强，PCR扩增的指数增长期越长，‘S型’曲线更加典型，荧光信号值更高，而且更适合做多重PCR检测。我们曾比较过多家公司的热启动Taq酶，在国外品牌中，英国Bioline公司的热启动Taq酶（Immulase）酶动力较好，可做4重PCR，等量起始模板CT30时的荧光信号值最高。在国内品牌中，BIOG热启动Taq酶的指数期较长，可做3重PCR，且扩增曲线的‘S’型不受影响，其它的国产品牌一般只能支持2重反应，在做3重反应时，扩增曲线低矮，荧光信号值较低，无典型扩增曲线，结果很难判定。

图1. 国产BIOG 热启动Taq酶检测流感病毒多重扩增曲线图： 1为甲流病毒检测曲线 2为乙流病毒检测曲线 3为内参基因。

三、选择灵敏度高的热启动Taq酶。一般说，Taq酶的扩增效率高，灵敏度就高，但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低，建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。最常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释，在较低的几个稀释度进行PCR检测，选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。目前国内市场上常用的ABI、Bioline、Biog的扩增灵敏度都比较高，但知名品牌T的灵敏度略低，研究者可根据自身的实验要求进行选择。

以上可见，目前国内市场上比较知名的国外品牌如ABI、Bioline等公司的热启动Taq酶性能较好，国产热启动Taq酶中，常州百代的BIOG热启动Taq酶的扩增性能不错，与国外名牌产品无明显差异，其它很多国产品牌的扩增性能不够理想，研究者需根据自己的实验要求和经费情况进行选择，最好做一个梯度稀释扩增实验，以检测热启动Taq酶的扩增效率和灵敏度。