基因工程-7-基因表达谱研究技术

7.1基因表达谱研究技术

• 胚胎原位杂交技术
• 胚胎抗体染色技术
• 基因芯片技术
• 蛋白质组学技术.

7.1.1胚胎原位杂交技术

原位杂交（in situ hybridization ,ISH ），是利用碱基互补配对的原理，用带有标记的目的DNA或RNA片段作为核酸探针，与胚胎或组织内的mRNA进行杂交，然后通过放射自显影、荧光显微镜观察或酶促底物显色的方法予以显示，确定目的基因的mRNA的存在和定位情况。

（1）原位杂交探针

探针与mRNA互补杂交结合，是负链的；

正链探针可以作为对照进行实验；

 （2）原位杂交基本方法

 

 

地高辛（Dig）标记系统；

 

7.1.2胚胎抗体染色技术

胚胎抗体染色技术( antibody staining)是利用固定剂将胚胎、组织或细胞固定，用特异性抗体进行抗原抗体免疫反应，一抗与目的蛋白结合后，再与二抗特异性结合，利用二抗连接不同的酶或荧光基团，就可以通过显色反应或荧光检测确定目的基因的蛋白在胚胎或组织内的定位与表达情况。

• 一抗与二抗
• 多克隆抗体
• 单克隆抗体.

抗体染色法

• 标本的准备与固定；
• 抗体结合反应；
• 显色反应；

 

7.1.3基因芯片技术

• DNA chip或DNA microarray
• 将cDNA或RNA以点的形式结合在尼龙膜上，玻片或塑料片上，形成矩阵排列，与同位素或荧光标记的探针杂交，通过放射自显影或荧光扫描检测杂交信号。