Exosomal long noncoding RNA LNMAT2 promotes lymphatic metastasis in bladder 1 cancer

本文选自看不懂的杂志，一起看看得了，应该没有什么花样。

摘要：有临床淋巴结转移的膀胱癌患者预后极差。VEGF-C在BCa淋巴结转移中起重要作用。然而，约20%有淋巴结转移的BCa中VEGF-C表达较低，提示BCa的LN转移与VEGF-C无关。在此，我们证明了BCa细胞分泌的胞外体介导的淋巴管生成促进了BCa的LN转移，这是以VEGF-C无关的方式进行的。我们鉴定了外泌体长非编码RNA（lncRNA），称为淋巴结转移相关的转录子2（LNMAT2），在体外刺激了HLEC管的形成和迁移，并在体内增强了肿瘤的淋巴管生成和淋巴结转移。在机制上，LNMAT2通过与异质核糖核蛋白A2B1（HRNPA2B1）直接相互作用，将LNMAT2负载到BCa细胞分泌的外泌体上。随后，外泌体LNMAT2被HLECs内化，表观遗传学上调prospero同源框1（PROX1）的表达，通过hnRNPA2B1募集和增加PROX1启动子中的H3K4三甲基化水平，最终导致淋巴管生成和淋巴结转移。因此，我们的发现突出了外泌体lncRNA介导的LN16转移的VEGF-C独立机制，并确定LNMAT2是BCa LN转移的治疗靶点。

我大概看完摘要知道作者作了什么了。作者要研究lnMAT2，这个东西哪来的呢？GEO挖来的。然后组织验证一波。发现肿瘤这个lnc更高，与预后相关，并且与淋巴结转移相关，vegf与淋巴结转移无相关性

文章说的是外泌体，作者又看看外泌体里的这个东西真的样。发现外泌体里比肿瘤的多，敲了肿瘤的lnc，外泌体里也减少了。

接着就是外泌体与淋巴结转移的关系了。首先是淋巴管生成的情况，体外实验验证外泌体的lnc对淋巴内皮的影响。

接着看看体内情况。发现瘤内注射外泌体可以促进肿瘤淋巴结转移的发生。研究淋巴结转移都用这个模型吗？不懂

作者又看看这个外泌体lnc对肿瘤什么影响，为什么要用外泌体教育，直接用过表达的细胞不就行了吗？发现有促进肿瘤的作用。

玩够了没有，可以做机制了吧。简单干脆，直接做pull down，打质谱，找蛋白，找到了目标蛋白，然后构建肽段观察作用部位。

然后看看HNRNPA的作用，发现敲减了以后外泌体里面的lnc减少了，所以说这个东西可以促进外泌体lnc转运。以往研究发现miR18a这个不去外泌体中，作者就看了外泌体和细胞比例以此说明外泌体货物增多原因。这个miR198可以被HN转运至外泌体作为阳性对照。体外验证外泌体可以被淋巴内皮细胞摄取。并且发挥促进淋巴内皮增殖的功能。

原来说的VEGF对淋巴内皮增殖作用显著，作者看了外泌体处理后淋巴内皮vegf的水平个，未见明显改变。有人提出，PROX1通过调节内皮细胞分化和转移扩散，对淋巴管系统的发育至关重要，作者就研究它了，别问作者怎么找到的，就是好文自有天帮。首先作者定位了外泌体在受体细胞的位置，发现在细胞核内多见，玩的还是一样的套路，找lnc的作用位点。当然是启动子区域切几段，然后用双荧光素酶报告实验验证而已。外体LNMAT2可以与淋巴管PROX1启动子序列形成一个三联体，并上调其转录水平。

hnRNPA2B1通过与靶DNA结合参与H3K4三甲基化（H3K4me3）相关的表观遗传调控。因此，我们研究了hnRNPA2B1是否通过调节HLECs中PROX1启动子区的H3K4me3水平来促进外泌体LNMAT2诱导的PROX1反式激活。染色质免疫沉淀（ChIP）显示，在LNMAT2转染的5637细胞（5637-EXOLNMAT2）和UM-UC-3-EXOLNMAT2分泌的外泌体处理的HLEC中，与hnRNPA2B1和H3K4me3相关的PROX1启动子序列富集。

既然找到靶点了，那么就该玩弄一下靶点了，发现加入prox1明显促进淋巴管状形成，并且外泌体处理后的肿瘤内及周围组织周围淋巴管增多，prox1染色明显增强。

按照我们一贯的套路，接下来就是临床相关性验证了。

文章确实是好文章，读了以后，总体感觉工作量太大，研究方法不算新，可能机制上比较新，总体来说，非常值得学习、借鉴。欢迎大家批评、指正。