作为一名科研汪
见惯了别人家的导师温柔睿智风趣幽默
见惯了别人家的实验经费取之不竭用之不竭
然而，最最可气的是
就连别人家的细胞
都养得又好又漂亮、长势喜人
而自己亲手「拉扯」长大的细胞
却常常动不动就莫名其妙状态不好
污染、甚至死亡... ...
养过细胞的童鞋应该都知道：血清，由于其复杂的内在成分和难以控制的外界因素，它既是细胞生长的必备营养，也是细胞死亡的「致命毒药」。
Follow me！看看你是否忽视了这些问题，让血清「良药」变「毒药」！
如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？
将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。
我们建议血清应保存在-20℃。若存放于4℃时，不要超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
血清为什么要热灭活？
一般情况下血清产品，特别是胎牛血清都是不经过灭活处理的，除非有特殊的实验要求（江莱生物的血清都是没有经过灭活处理呦）。
在现代科研实验中，除了免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清外。对于其他大多数的细胞来说，除非文献指出该细胞必须使用灭活血清，一般细胞培养可省略血清热灭活步骤。
而且很多情况下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下，其促进的比率也是微不足道。另外，血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染，从而给用户带来不必要的麻烦。
血清中沉淀是什么成分？如何预防和处理沉淀？
血清中沉淀主要有：纤维蛋白（絮状沉淀），甲胎蛋白，脂蛋白，冷凝集素，玻粘连蛋白，磷酸钙（显微镜下小黑点沉淀），胆固醇等。
原因：造成沉淀的主要原因是温度的改变。热灭活，反复冻融，长期储存于2-8℃或者室温，解冻过程中未混合等。
按如下操作可避免沉淀的产生：
1 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。
2 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。
3 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
4 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。
5 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。
6 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
目测法判断血清的质量？
目测法，我们可根据血清的颜色，沉淀，澄清度等进行区分。
颜色：颜色根据血清蛋白含量的不同，可表现出黄色或者红色。进口血清质量最好的呈现出淡黄、微红色，较差质量呈现出橘红色或鲜红色。热灭活血清或保存不当的，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红色，甚至咖啡色。
沉淀：血清中的沉淀主要是有纤维蛋白的凝聚产生。沉淀产生的原因很多，使用时反复冻融会增加沉淀。进口血清过滤分装前很少反复冻融，因此成品清澈。
澄清度：进口血清是由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡。国产血清绝大多数为新生牛血清，相对而言更加粘稠，颜色略深。
细胞培养中出现黑点是污染吗？如何处理？
一旦在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
1 细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
2 血清质量不好，反复冻融的结果;
3 配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
4 配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
5 培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
细胞培养中如何防止黑点？
1 尽可能地减少血清冻融次数。
2 培养基无需37℃水浴。
3 培养基保持最佳PH值7.0~7.2。
4 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。
5 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。
如何更换使用血清？
需要更换使用不同品牌或批次的血清之前，需提前对要使用的血清进行验证，可使用自己经常培养的细胞进行，保证该血清对细胞生长的促进作用。在更换使用时可以将要更换的血清和原本使用的血清 1:1 混合使用 1~2 代，待细胞完全适应后进行更换。
当我们废寝忘食，呕心沥血养着细胞的同时，也极有可能因为一时的疏忽和大意选择了品质不好的血清，导致珍贵的细胞意外身亡，一切归零！
所以，规范的操作方式与优质的血清产品，才是实验的基本保障。
文章来源于江莱生物（shjianglai666）