组织细胞DNA提取中如何使基因组DNA更容易释放出来

操作步骤：请自行准备：无水乙醇、异丙醇、1.5mL 离心管，生理盐水。

1取出洗涤液，按 70%比例加入无水乙醇， 9mL加入 21mL无水乙醇，18mL加入 42mL无水乙醇，混匀。

2.样本处理：A. 组织样本：取 10-20mg 左右的组织，用液氮研磨为粉末，转入 1.5mL离心管内，加入 100 μL生理盐水，振荡 15秒 （或直接在 100μL生理盐水中将组织匀浆为细胞悬液）；B. 细胞样本：取 1.5mL离心管，直接加入 200μL细胞样本。

3.加入 200μL裂解液， 20μL复合消化液，充分混匀，65℃温育 12分钟（如组织匀浆不充分，可适当延长消化时间至组织完全消化， 对于毛囊等难消化组织，可将消化时间延长至 1-2小时）。如需除去 RNA，可在加入裂解液后先加入 20μLBIOGDNase –Free RNaseA(货号：51006)，振荡混匀，室温放置 5分钟。再加入 20μL消化液，振荡混匀，65℃水浴 12分钟。

4.加入 400μL异丙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 DNA的提取与后续实验。

5.将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，12,000 rpm离心 1分钟，弃收集管内废液。

6.按每份样本 40μL取洗脱液（如 10份提取样本，即取 400μL洗脱液），放置于灭菌 1.5mL离心管，65℃预热。

7.将吸附柱放回收集管内，加 500μL洗涤液至吸附柱内，静置 2分钟，12,000rpm离心 1 分钟，弃收集管内废液。

8.将吸附柱放回收集管内，加 500μL洗涤液至吸附柱内，12,000rpm离心 1 分钟，弃收集管内废液。

9.将吸附柱放回收集管内，12,000rpm离心 2分钟，离去残留的洗涤液。

10.取出吸附柱，放入新的 1.5mL离心管内，加入 40μL上述预热的洗脱液，静置 2分钟，12,000rpm 离心 1分钟，收集 DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1.组织在提取前应匀浆充分，如无法充分匀浆，应延长消化时间至组织完全消化，直至肉眼无可见的组织块 。

2.使用本试剂盒，动物组织取样量不要超过 25mg，细胞量建议不高于 10^7。

3.洗涤液在使用前应加入乙醇后充分混匀，最好现用现配，每次根据所要提取的样本量计算后适量配制。