RevIT™ AAV Enhancer, 提高AAV产量的又一利器!

腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中使用最广泛的传递机制。近年来,基于AAV病毒所开发的基因疗法的研发及临床试验注册数量也呈指数级增长。截止本文撰写之时,美国食品和药物管理局已批准五项AAV疗法,也是全球市场上最为昂贵的药物,其中售价最高的Hemgenix®,每剂约为350万美元。由于该疗法每剂量可能需要1011-1016病毒载量,如何实现高效的AAV生产,已成为工艺流程优化中的重要一环。

Mirus成立于1996年,在核酸递送领域深耕多年,TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂支持 AAV及慢病毒(LV)从科研到GMP商业级别生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺,PEI),Mirus将专利的多聚物及脂质技术进行多重组合,针对不同细胞类型,不同应用场景,有着不同转染方案。欣博盛生物是Mirus中国授权代理商,如需购买Mirus产品,咨询产品技术问题,请联系~

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在病毒生产工艺方面,除了需要克服细胞递转过程中的多重阻碍,以实现更高效转染和更低细胞毒性;增强子的加入,可大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。但Mirus并没有止步于此,为了进一步提高下游生产中的AAV病毒基因组产量, 今年七月底Mirus发布用于AAV生产的RevIT™ AAV Enhancer,可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂或其他品牌转染试剂 (PEI)。基于HEK293悬浮细胞数据,相对于老版本AAV生产,RevIT™ AAV Enhancer可提高AAV基因组滴度1.2-4.9倍,并且便于使用,很容易整合入现有AAV生产工艺工作流程中。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出,使得AAV上产上游成本进一步降低成为可能,降低了基因治疗单剂量成本。

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● RevIT™ AAV Enhancer:可1.2-4.9X提升AAV病毒基因组滴度

平行对比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增强子(VirusGen + Enh 1.0)以及新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT),针对不同血清型 AAV2、AAV8、AAV9,AAV基因组滴度分别有着1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外,实验结果显示,在测试的所有血清型中,使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上得到更高比例的实心率 (图1)。实验结果表明,在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®转染试剂时,可显著提高病毒基因组滴度(GC/mL)及实心率(%Full Capsids)。

✍图1. 在加入RevIT™ AAV Enhancer后,相比Mirus老版本增强子,可1.2-4.9X提升AAV基因组拷贝数,改善AAV病毒实心率。

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● RevIT™ AAV Enhancer:具有广泛适配性,可搭配其他品牌转染试剂(PEI),AAV病毒基因组滴度有着显著提升

平行测试两个品牌转染试剂:Polyplus FectoVIR® 病毒转染试剂(“Polymer F”)以及Polyplus PEIpro®病毒转染试剂(“Polymer P”),在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer,针对不同血清型AAV2、AAV8、AAV9,AAV基因组滴度分别有着1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(图2)。实验结果表明,在搭配其他品牌病毒转染试剂时,Mirus RevIT™ AAV Enhancer可显著提高AAV病毒基因组滴度(GC/mL)。

✍图2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒转染试剂,在搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer,针对不同血清型,其AAV病毒基因组滴度都有着显著提升。

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● RevIT™ AAV Enhancer:具有广泛的适配性,可适用于不同培养基体系

TransIT-VirusGEN®转染试剂搭配RevIT™ AAV Enhancer,在不同类型病毒生产培养基中,具有很好的兼容性。测试使用293-VP 2.0细胞,搭配培养基类型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。实验结果表明,针对不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9,RevIT™ AAV Enhancer在不同培养基实验条件下,AAV病毒基因组滴度提升方面并无显著差异。

✍图3. 更换不同品牌病毒生产培养基,AAV病毒基因组滴度的增加无显著差异。

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 RevIT™ AAV Enhancer:实验流程灵活性,不同加入时间窗口有着近似表现

为了进一步确定加入RevIT™ AAV Enhancer可有效提高AAV病毒基因组载量,是否需要严格把控加入时间窗口。平行测试不同加入时间点,包括转染前30或60分钟、转染时及转染后。实验结果显示,相对于对照,在加入RevIT™ AAV Enhancer不同测试时间点, AAV8病毒基因组滴度都有稳步的提升(2倍),并且病毒实心率稳定保持在相同水平。该组实验结果表明,RevIT™ AAV Enhancer加入时间点的灵活性,一定程度上简化了生产工作流。

✍图4.  RevIT™ AAV Enhancer加入时间点的灵活性

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 实验tips:如何进行病毒转染试剂评估?什么是病毒载量?如何检测?

更多详细信息,请查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card 

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