小鼠成肌细胞C2C12培养技巧

C2C12细胞株是YaffeD,SaxelO建立的小鼠成肌细胞系的亚株。该细胞分化较快，可形成能收缩的微管，产生特异的肌肉蛋白。在骨形态形成蛋白（BMP-2）的作用下，该细胞可由成肌细胞分化为成骨细胞。检测发现该细胞鼠痘病毒阴性。

| 细胞复苏

溶解细胞过程要迅速；已溶解的冻存细胞不能在常温下存放太久，需要尽快离心去除DMSO。

| 细胞冻存

冻存条件

60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存。

【推荐海星HyCyte™一步冻存液(即用型、无血清、无需程序降温)】

细胞冻存步骤

1.常规方法收集对数期的贴壁 细胞或悬浮细胞于离心管中。

2.按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的大小计算所需冻存细胞数(参考数量: 5x10^5~ 5x10^6cells/mL)。

3.离心收集细胞。(参考离心条件: 4℃， 250g，离心4~6 min)。

4.收集培养细胞沉淀， 彻底弃去离心管中的上清液。

5.加入适量的HyCyte™ 一步冻存液于离心管中。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。

6.将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管1 mL或1.5 mL。

7. 立即将冻存管直接置于-80°C冰箱中(直立放置)完成"一步"冻存操作, 24小时后移入液氮或者-80C长期保存。

细胞冻存时，尽量吹散细胞，注意控制吹打力度。

| 细胞培养条件

培养基：DMEM-H+10%FBS+1%P/S

推荐传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃

| 传代操作

去掉培养皿中的培养基，加入PBS进行冲洗，并去上清;

加入胰酶进行润洗，并去上清;

放入CO2培养箱消化2-4min;

加入完全培养基终止消化，并吹打均匀。

| 常见问题

1. 为什么会出现空泡？

可能是铺板时铺得不够均匀，局部过于密集，密集地方的细胞就开始状态变差、空泡增多。也可能是血清差，需要更换优质血清，及时换液。

2. 为什么细胞长得慢？

可能是细胞接种得太少，细胞密度太低。可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养。

3. 为什么细胞状态变差，容易漂？

可能是血清问题，建议换血清，并注意血清要程序解冻，不能水浴化开；也有可能是细胞生长密集，需要及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长得过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。

| 注意事项

在培养过程中，保持细胞汇合度30％～90％

每一步操作都要轻柔小心，以免细胞受损

选用优质培养基，减少有害物质对细胞的刺激