安徽师范大学首届大学生生物联赛学科竞赛团队

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时光匆匆,转眼间为期一个月的暑期社会实践已经落下帷幕。由于我们的暑期社会实践主要是以实验为主,所以我们没有像其他团队一样奔波在外。每天都能看到队友们在实验室里忙碌的身影。在这一个月里,我们大家都受益匪浅,也真真切切体会到 科研人员工作的辛劳。

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(图为团队的队旗)

一、我们的实践日常

我们的实验是研究8种雁形目鸟类nrDNA进化,虽然每天 重复一样的实验步骤,但我们并不感到厌烦,相反,我们很享受这个过程。每当实验成功后,大家在一起欢呼。我想这大概是我们在一起最幸福的时刻了吧!实验失败了,我们不气馁不放弃,我们始终坚信着一定会成功的,胜利就在前面。大家互相鼓励着,督促着。很幸运,拥有这些队友。下面我想简单回忆下过去的一个月的点点滴滴,那些属于我们的实验梦。

(一)DNA的提取

总DNA的提取采用改进的CTAB(Cetyl-trimethy-Ammonium Bromide;中文名,十六烷基-三甲基-溴化铵)法,材料为鸟类脏腑。

主要步骤如下:

⑴向2mlEP管中加入1300μl已加巯基乙醇CTAB提取液,静置待用;

⑵ 取上述鸟类脏腑少许,剪碎,放入研钵,加少许研磨剂,研磨至粉末状,倒入提取液中,混匀,65℃保温一个小时左右(保温过程中需混匀几次);

⑶ 将EP管放在普通离心机中,12000rpm,离心10min;

⑷ 取上清液,加CI(氯仿:异戊醇=24:1)至满管,振荡10min;

⑸再次离心,10℃,12000rpm,10min;

⑹再取上清液于2ml EP管中,加入等体积CI(氯仿:异戊醇=24:1),振荡10min;

⑺再次进行步骤⑸;

⑻取上清液于2ml EP管中,加入2/3体积冰异丙醇,于-20℃环境下沉淀半个小时至一个小时;

⑼在4℃环境下离心,12000rpm,10min,弃上清液,去沉淀;

⑽用75%乙醇洗涤两次以上,风干;

⑾再用200μl 0.5×TE溶液溶解。

以上即DNA的总提取过程。


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(二)琼脂糖电泳

⑴ 用电子天平称取0.3g琼脂糖,加30ml1×TAE溶液,并摇匀;

⑵将配置好的溶液放在微波炉中加热两分钟至溶液澄清;

⑶稍冷却后,取少许EB加入溶液中,振荡均匀;

⑷将溶液加入准备好的制胶槽内,冷却;

⑸待其凝固后,小心拔去梳齿,使点样孔保持完好;

⑹点样后,于120V电压下进行半小时左右的电泳,后取出置于紫外分析仪下观察,拍照。

(三)PCR扩增

(1)通过琼脂糖凝胶电泳的过程将目的DNA片段与其他的杂带尽量的分开,然后用干净的手术刀割下含目的DNA琼脂块,放入1.5ml离心管中;

(2)加入Binding BufferII 溶液700ul/管,60oC水浴10分钟,使胶块融化。水浴时,每2min振荡一次(动作不能太剧烈);

(3)将融化的胶溶液转移至UNIT-10柱中并套放在2ml收集管内,室温放置2min后,室温离心一分钟,8000rpm;

(4)取下UNIT-10柱,倒掉收集管中的废液后,再次将UNIT-10柱放入收集管中,加入500ul Wash Solution,室温离心一分钟,8000rpm;

(5)重复上一步;

(6)取下UNIT-10柱,倒掉收集管中的废液,将UNIT-10柱放入同一个收集管中,12000rpm室温离心两分钟,自然晾干至无酒精味;

(7)将UNIQ-10柱放入1.5ml离心管中,在柱子膜中央加60oC的Elution Buffer,40ul,静置5min;

(9)在离心机中室温离心1min,12000rpm,离心管中的液体即为回收的目的DNA片断,标上标签,放入冰箱中待用。

�(四)PCR反应体系

94oC 5分钟;94oC变性30秒, 54oC退火30秒, 72oC延伸2分钟, 30个循环;72oC终延伸10分钟。


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(五)测序

将做好的克隆(每个样品一个)送到上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序工作。

二、总结

一个月的时间磨砺了我们的意志,锻炼了我们的动手能力,让我们把课本上学的知识 原理运用到了实践中。经过这次实践也更加坚定了我们对未来的信念。生物界中有太多的奥妙,等着我们去发现去体会。

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