CTAB法结合基因组提取试剂盒——提取高纯度基因组DNA

实验步骤

1.研磨充分一定量的植物组织，加入500ul 2xCTAB（含0.2%的β-巯基乙醇），混匀。
2.65℃水浴，45min，期间颠倒数次。
3.加入Tris饱和酚/氯仿（1：1），颠倒混匀5min；12000rpm 离心10min
4.取上清（约500ul）于新的离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），充分混匀。
5.12000rpm，10min；取上清，加入1ml -20℃预冷的无水乙醇，置于-20℃，30-40min。
6.12000rpm，10min；弃上清，加入500ul ddH2O 溶解沉淀。
7.加入120ul 浓度为100ug/ml 的RNase，使终浓度为20ug/ml，混匀，室温放置10min。
8.将上述DNA溶液加入到纯化柱子，静置5分钟，12000rpm离心，2min，收集溶液。
9.向离心后的液体中，加入25ul 3M NaAC（pH5.2）和525ul 异丙醇，混匀室温放置5min。
10.12000rpm，8min，弃上清，用70%乙醇洗涤两遍沉淀。
11.去除干净多余的乙醇，用100ul ddH2O溶解。
12.置于-20℃，保存。

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试剂

2xCTAB提取液（含0.2%的β-巯基乙醇）：CTAB-2g；NaCl-8.18g；EDTA0.74g ; 1M Tris-HCl 10ml（pH8.0）；200ul β-巯基乙醇。
3M 醋酸钠：40.8g 三水醋酸钠，加入40ml ddH2O 溶解，用冰醋酸调到pH5.2，最后定容到100ml。