诺禾-蛋白表达纯化之通关技巧

拿到一个蛋白以后，首先需求对蛋白停止全面的理解，所谓知彼知己方能百战不殆：

1. 蛋白二级构造预测：蛋白质的二级构造能够提供蛋白质的 α 螺旋、β 折叠和柔性区的散布状况。
   http://www.compbio.dundee.ac.uk/jpred/

2. 跨膜区预测：蛋白质的跨膜区的位置预测有助于我们理解蛋白质共有几次跨膜，肯定胞外域和胞内域的位置。
   http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/

3. 信号肽预测：蛋白质的信号肽预测有助于我们理解蛋白质的一些特性，例如蛋白能否为分泌蛋白。
   http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/

4. 糖基化位点预测：糖基化位点预测，在蛋白的表达和结晶过程中有重要参考意义。
   http://www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/

5. 理化性质剖析：蛋白质的理化性质有助于我们理解蛋白质的局部特性，有助于蛋白质的纯化。
   https://web.expasy.org/protparam/

6. 亲水性疏水性剖析：剖析蛋白的亲水性和疏水性，为选择纯化办法提供参考。
   https://web.expasy.org/cgi-bin/protscale/protscale.pl

俗话说的好，能表达的蛋白千篇一概，不表达的蛋白各有不同。这蛋白不表达的缘由有很多，能够从以下几点思索：

载体构建能否适宜——检查启动子、读码框、终止子等。某些基因含有许多稀有密码子，特别是起始密码子后15 个碱基内的，会显著影响蛋白的表达。

表达系统能否恰当——常见的有四大表达系统，即大肠杆菌、酵母细胞、昆虫细胞以及哺乳细胞表达系统。不同的表达系统合适表达不同的蛋白，这个要依据状况选择。

标签选择能否适宜——GST、SUMO 等标签具有进步交融蛋白可溶性的才能。

实验步骤能否正确——细节决议成败，一个操作上的小失误，可能直接影响最终结果。

其次，重组蛋白表达系统的选择也是关键的一步！

表1. 重组蛋白表达系统引荐

最后一步就是将表达的蛋白停止纯化。选择适宜的纯化办法，能够进步蛋白的纯化效率，让蛋白纯化简单便利。常用的办法有:亲和层析、离子交流层析、凝胶过滤层析、疏水层析等。

亲和层析
亲和层析纯化是应用生物大分子物质具有与某些相应的分子专注性可逆分离的特性停止蛋白纯化的技术。

离子交流层析
离子交流层析是一种根据蛋白外表所带电荷量不同停止蛋白别离纯化的技术。

凝胶过滤层析
凝胶过滤(也叫排阻层析或分子筛)是一种依据分子大小从混合物中别离蛋白质的办法。

疏水作用层析
疏水作用层析是应用盐-水体系中样品分子的疏水基团和层析介质的疏水配基之间疏水力的不同而停止别离的一种 层析办法。

表2. 不同层析办法比照

经过上述办法，不晓得大家有没有控制蛋白表达和纯化的办法~

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参考文献
[1] Banos G, Coffey M P, Wall E, et al. Protein expression and purification[J]. Protein Expression & Purification, 1990, 57(2):206–216.
[2] Ghaemmaghami S, Huh W K, Bower K, et al. Global analysis of protein expression in yeast.[J]. Nature, 2003, 425(6959):737-741.