尿液 RNA 如何提取？

BIOG特点

◎提取 RNA 纯度高，无抑制剂，A260/A280 为 1.8-2.0；

◎产率高，同样的样本量提取的 RNA 更多；

◎可用于尿液样本中 RNA 的提取，提取后的 RNA 可用于核酸检测使用；

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶剂，安全无毒。

BIOG介绍

BIOG RNA Urine Kit 采用了最新的优质进口离子膜，裂解液和洗脱液经过多次优化，能高效地分离 RNA。提取得到的 RNA 较其它品牌的同类试剂盒产量更大，纯度更高，最大限度地去除了蛋白、色素、脂类、DNA 等杂质污染，可以直接应用于 Northern 杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、cDNA 文库构建、体外翻译等各种常规分子生物学实验。

操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、生理盐水、10mL 无 RNA 酶离心管、1.5mL 无 RNA 酶离心管。

2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：

a) 析出液：4.5mL 加入 25.5mL 无水乙醇，混匀；9mL 加入 51mL 无水乙醇，混匀。

b) 洗涤液：9mL 加入 21mL 无水乙醇，混匀；18mL 加入 42mL 无水乙醇，混匀。

c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在 37℃溶解，摇匀后使用。

3. 取尿液 5mL(尿液的取用量在 1-5mL 范围内)置于 10mL 无 RNA 酶离心管中，5000 rpm 离心 5 分钟，小心弃上清，向离心管中加入 2mL

生理盐水，轻轻振荡混匀，5000 rpm 离心 5 min，弃 1900μL 上清，剩余 100μL 上清，振荡混匀。

4. 加入 200μL 裂解液和 20μL 消化液，振荡混匀，56℃水浴 10 分钟。

5. 加入 500μL 析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响 RNA 的提取与后续实验。

6. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置 2 min，12,000 rpm 4℃离心 1 min，弃收集管内废液。

7. 将吸附柱放回收集管内，加 500μL 洗涤液至吸附柱内，静置 2 min，12,000 rpm 4℃离心 1 min，弃收集管内废液。

8. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心 2 min，离去残留的洗涤液。

9. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 无 RNA 酶离心管内，加入 30-60 μL 洗脱液，静置 3 min，12,000 rpm 4℃ 离心 2 min，收集 RNA 溶液。

提取的 RNA 即可用于下一步实验或-70℃保存。