学习小组Day7笔记--何小娜

学习内容：

• 一代、二代、三代测序
• 二代测序的大体流程

• NGS组学都包含哪些分类

  
  
  
  

原理理解

一代测序（桑格尔-双脱氧链终止法）：利用一种DNA聚合酶来延伸结合待定序列模板上的引物，直到参入一种链终止核苷酸为止，反应体系1-4---引物、DNA聚合酶、四种dNTP。

二代测序（循环阵列合成测序法）：将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面（Flowcell），这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后，在Flow cell上形成数以亿计Cluster，每一个Cluster是具有数千份相同模板的单分子簇，然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸，通过可逆性终止的边合成边测序技术对待测的模板DNA进行测序。

二代测序流程（illumina测序）

1、DAN文库构建（sample preparation），利用超声波把DNA样本打断成小片段，小片段两端加上不同的接头，构建单链DNA文库。
2、Flowcell, 用于吸附DNA片段的槽道，文库中的DNA在通过Flowcell的时候会随机附着在Flowcell的表面的泳道上，泳道表面都附着有很多接头，能和建库过程中加载DNA片段的两端接头相互配对，并能支持DNA在其表面进行桥式PCR扩增。
3、桥式PCR扩增与变性，桥式PCR以Flowcell表面所固定的接头为模板，进行桥形扩增，通过不断的扩增和变性，最终每个DNA片段都将在各自的位置上集中成束。
4、测序，边合成边测序，反应体系（DNA聚合酶、接头引物、带有碱基特异荧光标记的4种dNTP），收集荧光信号，最后利用计算机分析将荧光信号转化为测序碱基。

今天学习测序相关的知识，也是一直想学的，但是没有好好认真去学习的，可能真正理解还需要一些时间。