2022-06-20

AC16细胞培养说明

AC16人心肌细胞可以连续传代，并且当在无有丝分裂原的培养基中培养时可以分化。这些细胞可用于研究心肌细胞的发育调控。

01

AC16细胞基本信息

人心肌细胞AC16

名称：AC16人心肌细胞

来源：心脏组织

特性：贴壁生长

形态：成纤维细胞样

支原体：无

推荐传代比例：1:2-1:3

推荐换液频率：3次/周

冻存液：无血清冻存液，液氮储存

规格：1x10^6cells/T25或1mL冻存管

培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

AC16人心肌细胞

完全培养基

02

AC16细胞处理方法

复苏细胞T25瓶

复苏AC16细胞

1.拿到AC16细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，

2.用75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置4h，显微镜下观察细胞状态；

培养指南

AC16细胞复苏步骤

将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜）。

第三天换液并检查细胞密度。

AC16细胞传代操作

如果AC16细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

a.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化3 -5min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

AC16细胞冻存步骤

待AC16细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

1.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

2.根据AC16人非小细胞肺癌细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。