紧接着上次的汇总，这次把剩下部分的也发出来，您的满意就是我的快乐之源
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什么是原料药、目录肽、合成肽
原料药（活性药物成分）是医药中具有药物活性的成分，如缩宫素、恩夫韦地等。目录肽是市场上销售的多肽，他们通常以较高的纯度水平批量生产。合成肽通常是根据客户的具体要求定制，如特定序列、修饰、不同纯度、不同长度等要求。昂拓莱司提供的API肽合成周期为2-3周。
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单个订单的最少合成量是多少？
公司提供的单条订单的最少合成量是1mg，用于研究的多肽和GMP药物肽合成的量在昂拓莱司没有上限
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能够合成的多肽的最大长度是多少？
我们昂拓莱司成功合成了长度为120个氨基酸的多肽。50个氨基酸长度的多肽属于常规合成。
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什么是固相合成？
氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团保护的氨基酸共价连接在固相载体上。在三氟乙酸的作用下，脱掉氨基的保护基，这样第一个氨基酸就接到了固相载体上了。然后氨基被封闭的第二个氨基酸的羧基通过N,Nˊ-二环己基碳二亚胺（DCC，Dicyclohexylcarbodiimide）活化，羧基被DCC活化的第二个氨基酸再与已接在固相载体的第一个氨基酸的氨基反应形成肽键，形成二肽。重复上述肽键形成反应，使肽链从C端向N端延长，直至达到所需要的肽链长度。
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什么是树脂和链接剂?
树脂是一种以聚苯乙烯等为基质的聚合物支架，是人工合成的固相介质。不同的树脂有不同的特性。如聚乙二醇在非极性溶剂中膨胀，而聚苯乙烯在极性和非极性溶剂中都膨胀。链接剂是链接树脂支架与基质的中间结构。不同的链接剂，适用于基质中的不同功能团。
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什么是保护基团？
保护基团是能够结合功能基团并阻断其反应活性的片段。有些是acid-labile保护基团，如Boc和tert-Bu酯类物质。有些是base labile保护基团，如Fmoc和Fm酯类物质。还有一些是fluoride-labile保护基团，如Tmsec和Tmse酯类物质。为确保羧基和氨基间的有效耦合，保护基团应该易于被附加和去保护，且不影响其它肽段。
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为什么要进行N端乙酰化，C端酰胺化修饰？
化学合成的肽往往携带游离的氨基和游离的羧基。而肽的序列往往代表了母本蛋白的序列，为了与母本蛋白更为接近，肽末端往往需要封闭，即N端乙酰化和C端酰胺化，这些修饰会减少多肽的总电荷，降低多肽的溶解度，也可以使肽模拟它在母本蛋白中α氨基和羧基的原始状态。
如果需要对N端进行乙酰化修饰或对C端进行酰胺化修饰，请在下单时明确。合成一旦结束，则不能再进行修改。
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荧光标记时，肽和修饰标记的染料之间需要加一个间隔吗？
多数染料属于大分子量芳香族氨基酸，在多肽中引入这一类大型分子，为了避免多肽与标签之间发生相互作用，维持蛋白的构象及其生物学活性，我们推荐引入一个可弯曲的间隔区，比如Ahx, Ahx是一个含有6碳分子的环状结构，可以维持荧光标签的稳定性。否则，FITC很容易结合多肽序列中的半胱氨酸残基或者赖氨酸残基。
通常情况下，生物素、FITC一类的染料既可以标记在蛋白的氨基端也可以标记在蛋白的羧基端。然而，为了在最短时间内，最便捷又高效地合成多肽，昂拓莱司推荐客户选择标记在氨基端。因为一个多肽的合成往往是从羧基端开始的，这样一来，氨基端的修饰便成为最后一个环节，不需要再进行特别的结合作用。反之，羧基端修饰需要额外的环节，因此过程更加复杂。
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怎样计算多肽的浓度？
肽纯度是指目标序列占肽总量的百分比。因为合成中肽键的形成不是100%有效，不是所有的多肽链都是目标序列。有些链可能无法完成，或者氨基酸可能无法正确地与某些链结合。这些被删除的序列在你的混合物中占一定比例的肽。我们使用反相高效液相色谱法结合质谱分析对粗肽进行分析和纯化，以获得所需的目标序列纯度。
在您的肽被纯化和冻干后，白色肽粉将包含一些非肽成分，如水、吸收溶剂、反离子和盐。净肽含量包括最终产品中肽的实际重量百分比。这个数字在50%到90%之间变化，这取决于纯度、合成和纯化的顺序和方法。在计算用于生物分析或其他敏感肽实验的肽溶液浓度时，必须考虑肽含量。肽浓度可以通过减去非肽重量来确定溶解溶剂的体积。例如，当使用1mg最终产品制成1mg/ml肽含量为80%的溶液时，您将使用800ul而不是1000ul的溶剂。
肽含量不是肽纯度的指标；这是两种测量方法。纯度由高效液相色谱法（HPLC）测定，并指示是否存在带有不希望序列的污染肽。非肽的总含量与总肽含量无关。通过氨基酸分析或紫外分光光度法准确测定净肽含量。
根据冻干肽的重量很难确定实际的肽浓度。冻干肽可含有10-70%重量的水和盐。与疏水性肽相比，亲水性更强的肽通常含有更多的结合水和盐。
如果肽序列中有发色团（W或Y残基），根据这些残基的消光系数可以方便地确定肽浓度。
以下步骤可用于计算：
使用1-cm电池在280 nm中性pH条件下发色残基的摩尔消光系数：
色氨酸5560AU/mmole/ml
酪氨酸1200AU/mmole/ml
肽序列中每个发色团的消光系数通常被认为是加性的，即肽的总摩尔消光系数取决于序列中这些同源残基的类型和数量。
计算：mg肽/ml=（A280 x DF x MW）/e，其中A280是溶液在1 cm细胞中280nm处的实际吸光度，DF是稀释因子，MW是肽的分子量，e是每个生色团在280 nm处的摩尔消光系数
假设的例子：在一个1厘米的细胞中，序列为grkkrqrrrppqq（MW=1847）的肽的50倍稀释溶液在280 nm处读数为0.5AU。计算肽储备溶液中的原始肽浓度：
Mg肽/ml=（0.5AU x 50 x 1847Mg/mmole）/[（1 x 5560）+（2 x 1200）]AU/mmole/ml=5.8
注意事项：
任何吸光度的计算都假设肽是展开的，发色团是暴露的，这通常是短的，可溶肽的情况。如果对肽的溶解度或折叠有疑问，建议在变性条件下进行测量（例如，6M GdnHCl或8M尿素）。显然，这些肽溶液将变得无用，除非变性剂被去除。
如果序列没有Trp或Tyr，唯一可行的选择是进行氨基酸分析。
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如何利用SDS-PAGE法去除小的多肽？
您的样品中是否含有<20kDa的目标蛋白？昂拓莱司推荐您点击下载关于 用SDS-PAGE法去除小分子合成肽的方案。Tricine-SDS-PAGE方案其中包括考玛斯亮蓝染色和电泳的实验方法。
Tricine-SDS-PAGE被普遍用于分离分子量为1-100 kDa的蛋白，它被认为是分辨<30 kDa蛋白的首选电泳系统。
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如何将多肽溶解在DMSO中？
二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻保护剂经常应用于细胞库。在细胞冷冻过程中，DMSO可防止胞内/胞外晶体的形成，其工作浓度为10%。DMSO通常可与盐或血清白蛋白结合。
疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加细胞的通透性，若多肽溶解于DMSO中则会对细胞产生毒性作用。高浓度的DMSO绝不可应用于细胞培养中。浓度为5%的DMSO即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍0.5% DMSO，少许可以容忍1%的浓度，而不表现出严重的细胞毒性。然而原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线(可行性)，其浓度应低于0.1%。
对于某些疏水性非常高的多肽，可先尝试将其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中，然后慢慢 (一滴一滴地)将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中，直至理想浓度。如果滴加过程中，肽溶液开始变浑浊，说明已经达到了溶解极限。另外，超声波有助于多肽溶解。
经验：
对几乎所有的细胞来说，浓度为0.1%DMSO是安全的。
广泛被用于细胞培养的DMSO终浓度为0.5%，不会引起细胞毒性。
虽然对部份细胞来说，1%DMSO也不会产生细胞毒性，但我们推荐0.5%。
也有5%DMSO成功地应用于某些细胞的案例。
始终保持终浓度在0.5%，但储存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。
以上，就是本文的全部内容了，关于多肽的知识我们还会持续更新，点个关注不迷路！