对fasta/fastq进行一些小操作

刘小泽写于18.12.27

参考biostar handbook以及Wei Shen的SeqKit(处理fa/fq领域还比较出名)http://bioinf.shenwei.me/seqkit/,它可以处理压缩的或者解压的fa/fq

下载测试数据

wget http://data.biostarhandbook.com/reads/duplicated-reads.fq.gz
wget ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/release/viral/viral.1.1.genomic.fna.gz
wget ftp://ftp.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/release/viral/viral.1.protein.faa.gz

小操作们

先看一下整体的数据统计

$ seqkit stat *.gz
file                      format  type     num_seqs    sum_len  min_len   avg_len  max_len
duplicated-reads.fq.gz    FASTQ   DNA        15,000  1,515,000      101       101      101
viral.1.1.genomic.fna.gz  FASTA   DNA             7    197,450    1,608  28,207.1  154,675
viral.1.protein.faa.gz    FASTA   Protein       113     56,244       38     497.7    3,122

关于GC含量

使用fx2tab 将fq/fa的统计信息转为制表符分割的表格,(fasta默认包括ID、sequence;fastq默认包括ID、sequence、quality);另外可以自己指定length、GC等信息

# 默认输出:ID、sequence
$ seqkit fx2tab viral.1.1.genomic.fna.gz
# 指定输出(输出name、GC、length)
$ seqkit fx2tab --name --only-id --gc --length 
viral.1.1.genomic.fna.gz

NC_024015.1         1608    44.22
NC_001798.2         154675  70.38
NC_030692.1         8908    50.10
NC_027892.1         8957    40.57
NC_029642.1         9006    39.88
NC_001607.1         8910    50.07
NC_001422.1         5386    44.76
# [--name可以用-n替代,--only-id可以用-i替代]

当然,除了GC含量,任何碱基的含量也可以得到

$ seqkit fx2tab -H -n -i -B a -B c -B ac viral.1.1.genomic.fna.gz
#name   seq qual    a   c   ac
NC_024015.1         27.18   26.43   53.61
NC_001798.2         14.87   35.03   49.90
NC_030692.1         25.03   25.25   50.28
NC_027892.1         29.68   19.44   49.11
NC_029642.1         30.14   19.22   49.36
NC_001607.1         25.30   25.54   50.84
NC_001422.1         23.97   21.48   45.45

如何根据ID得到fa/fq的子集?

这个还真是一个高频问题,许多时候就想要一个fastq/fasta中的某些ID的信息,利用seqkit grep可以方便解决

# 先做一个测试数据,包括一些ID信息(就是从duplicated-reads.fq.gz中随机取样)
$ seqkit sample --proportion 0.001 duplicated-reads.fq.gz | seqkit seq --name --only-id >id.txt
SRR1972739.2996
SRR1972739.3044
SRR1972739.3562
SRR1972739.4162
SRR1972739.5975
# 然后根据ID抽取其中的序列
$ seqkit grep --pattern-file id.txt duplicated-reads.fq.gz > dup_sub.fq.gz
# 用这个检查一下是不是这些ID
$ seqkit seq --name --only-id dup_sub.fq.gz

找到质量差的碱基(非ATCG)并定位它们

先用conda安装好csvtk

$ seqkit fx2tab -n -i -a xxx.fq.gz | csvtk -H -t -f 4 -r -i grep  -p "[^ATCG]"
# 因为这里的实例数据都是不错的,没有低质量(可能之前的序列结果又更新了)。可以自己找一个包括N碱基的序列试试,替换掉xxx.fq.gz就好
# csvtk参数表示:
# -H: --no-header-row 
# -t: --tabs 
# -f: --fileds 
# -r: --use-regexp
# -i: --ignore-case
# grep -p: grep --pattern

假入找到了低质量碱基,我们想过滤掉

# 先找到低质量序列ID
$ seqkit fx2tab -n -i -a xxx.fq.gz | csvtk -H -t -f 4 -r -i grep  -p "[^ATCG]" | csvtk -H -t cut -f 1 > id2.txt
# 然后找到这些ID并去除
$ seqkit grep --pattern-file id2.txt --invert-match xxx.fq.gz >clean.fa

或者我们想看看这些低质量碱基所在序列的信息(包括基因ID、正负链、起始终止位点等)

$ seqkit grep --pattern-file id2.txt xxx.fq.gz | seqkit locate --ignore-case --only-positive-strand --pattern N+
# 其中--pattern可以多设置几个,就找出包含多种碱基的序列,比如可以再加一个 --pattern K+
# 这个+表示含有一个或者多个前面的碱基

想要移除重复的序列

$ seqkit rmdup --by-seq --ignore-case duplicated-reads.fq.gz > rmdup.fq.gz
# 如果序列非常大的话,可以用 -m/--md5,利用md5信息代替原始序列信息,来减少内存占用
# 如果想根据序列名进行去重,可以使用参数 --by-name

序列定位motif/subsequence/enzyme digest sites

假入现在有一个文件存放的是motifs / enzyme digest sites

$ cat enzymes.fa
>EcoRI
GAATTC
>MmeI
TCCRAC
>SacI
GAGCTC
>XcmI
CCANNNNNNNNNTGG #表示我们这里就像匹配到CCA和TGG,中间保证9个碱基就好

我们为了保证上面的XcmI这种情况也能成功进行匹配,需要定义一个-d或者--degenerate参数

seqkit locate --degenerate --ignore-case --pattern-file enzymes.fa viral.1.1.genomic.fna.gz
#或者
seqkit locate -d -i -f enzymes.fa viral.1.1.genomic.fna.gz

将fasta序列排序

可以按照序列长度

$ seqkit sort --by-length viral.1.1.genomic.fna.gz > sorted.fa
# 对于大型的fasta文件,可以使用-2或者--two-pass减少内存使用

以上都是一些较为常用的小操作,对于更复杂的比如“拆分fasta”、“合并fasta“等,用到可以再去搜索


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