小组织包埋和切片方式

一 准备

1 组织准备：液氮冻存的小组织。
2 仪器准备：切片机或；-20冰箱；金属块；预冷镊子；金属铁棒（直径约等于组织大小）；液氮。
3 耗材准备：干冰；OCT；
注意事项：
OCT使用前需无气泡，需先倒置使得OCT位于管口，每次使用均匀挤出即可。该种操作方式不会产生气泡。
尽量保证操作环境湿度低。或者全程操作都在切片机或者-20℃/干冰环境。湿度大时，低温包埋块和组织外易产生冷凝水并结霜，使得组织与OCT或者小包埋块与固定用OCT之间易分离。

二 操作流程

1 从液氮中取出组织，放置于干冰中的保存盒中备用。
2 将切片机样本托上涂满OCT，至0.5cm~1cm，使OCT成为一个较平整均匀的圆盘。
3 将样本托放置于切片机样本头固定，将样本托表面OCT切平。记录样本托方向，确保再放置能对回到原本位置，取下样本托放置于-20环境。

削平OCT的样本托

4 使用金属棒将切平的样本托OCT上做出组织合适大小的凹陷，放在-20的金属块或者切片机内备用。此时凹陷内OCT融化，方便与裹在组织外的OCT融合。

带凹陷的样本托，红色为凹陷位置

样本包裹oct

5 将小块组织取出，并浸入到室温（约20℃）的OCT中，需要使得组织和OCT之间无气泡。将裹好OCT的小块组织放置于样本托OCT上的凹陷内，可以在此时确定好组织方向。此时切片方向已经确定，且样本外OCT与凹陷内融化的OCT融合，形态差异较小。
6 在凹陷旁边充填OCT，使得无气泡，且较平整。

操作整体流程

7 使用干冰速冻的冷冻锤速冻组织，注意冷冻锤重量，不可压扁组织。必要时可以手持使组织压力较小，或者使用速冻的其他平整金属块。注意，该步骤必须迅速。整个速冻过程尽量控制在一分钟左右。干冰速冻的金属块足以在这段时间内将组织完全冰冻，如果冰冻较慢，易产生冰晶，影响实验真实性。
8 将样本托和样本固定回冰冻切片机样本头，对准原来的位置，退刀，即可开始修片和切片。切面会与削平的OCT完全平行。