中大量血液DNA提取的操作步骤有哪些？

操作步骤（请自备：无水乙醇、异丙醇、1.5mL 灭菌离心管、生理盐水）

1. 取出洗涤液，按终浓度 70%比例加入无水乙醇，如 3mL 加入 7mL 无水乙醇，9mL 加入 21mL 无水乙醇，充分混匀；

2. 取 1.5mL 离心管 1 支，加入 1mL 已经解冻或新鲜的血液（冷藏血液需先轻振混匀后再加入），再加入 70μL 结合液，充分振荡 15 秒，室温放置 5 分钟，13,000rpm 离心 5 分钟；

3. 彻底吸弃上清，加入 0.8mL 生理盐水，振荡至管底沉淀彻底分散，无结块，13,000rpm 离心 5 分钟(注意将管盖、管壁粘附的血迹洗净)；

4. 彻底吸弃上清，加入 0.2mL 生理盐水，振荡至管底沉淀彻底分散，无结块，再加入 180μL 裂解液、20μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴10 分钟；[注意：如需除去 RNA，可在加入裂解液后先加入 20μL BIOG DNase –Free RNase A(货号：51006)，振荡混匀，室温放置 5 分钟。再加入20μL 消化液，振荡混匀，65℃水浴 10 分钟。]

5. 取出离心管，放置到室温，3,000rpm 离心 30 秒，加入 0.4mL 异丙醇，轻轻颠倒混匀 8 次，如有半透明悬浮物，不影响 DNA 的提取与后续实验；

6. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，13,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液；

7. 将吸附柱放回收集管内，加 600μL 洗涤液至吸附柱内，静置 2 分钟，13,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管内废液；

8. 将吸附柱放回收集管内，13,000 rpm 离心 2 分钟，离去残留的洗涤液。同时，按每份样本 40μL 取洗脱液（如 10 份提取样本，即取 400μL洗脱液），放置于灭菌 1.5mL 离心管，65℃预热。

9. 取出吸附柱，放入新的 1.5 mL 灭菌离心管内，在吸附柱中心加入 40 μL 预热洗脱液，静置 2 分钟，13,000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA溶液。提取的 DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。

注意事项：

1. 裂解液、洗涤液、结合液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻。

2. 洗涤液在使用前应加入乙醇后充分混匀，最好现用现配，每次根据所要提取的样本量计算后适量配制。

3. BIOG Medi Blood DNAIsolate Kit 设定的标准提取血量为 1mL，客户如改变提取血量，请同比例增减结合液、裂解液和消化液的使用量，洗涤液的量建议不低于 500μL，洗脱液的量客户可根据对 DNA 浓度的要求进行选择，最低可使用 20μL 洗脱液。

4. 裂解液如有白色絮状物析出属正常现象，置于 37℃水浴中溶解即可。