Enzo Life Sciences丨艾美捷 ELISA免疫分析的基础知识

理解免疫分析的基本原理很容易。基于抗体的免疫分析系统的基本组成部分有三个：用于检测和定量的抗原；针对这种抗原的特异性抗体；以及测量给定样本中抗原量的系统。虽然这似乎是一个非常简单的系统，但在许多情况下，为了快速方便地进行测量，还需要许多其他分析材料。下面就来看一下Enzo Life Sciences 艾美捷的夹心ELISA&竞争ELISA测定原理。

一、Enzo Life Sciences丨艾美捷 免疫测定/夹心ELISA试剂盒

免疫测定分析，也称为夹心ELISA（酶联免疫吸附试验），使用两种抗原特异性抗体捕获或“夹心”在孔中检测抗原。免疫计量分析显示抗原浓度和底物反应之间存在直接相关性。免疫计量分析通常使用涂在平板上的“捕获”抗体结合感兴趣的抗原。在第二次孵化期间，抗原被第二个抗体结合“检测”抗体，也是抗原的特异性抗体。检测抗体可以由二级抗体酶结合物结合，或者检测抗体本身是酶结合物。当向分析中添加显色底物以显色时，抗原浓度高的样品比抗原浓度低的样品产生更多信号抗原浓度，产生与样本中抗原量成正比的信号。然后，这种相关性可用于从标准曲线推断未知样本中的抗原浓度。

二、Enzo Life Sciences丨艾美捷 竞争ELISA试剂盒

在竞争性酶免疫分析（EIA）中，样本中的抗原与与报告酶结合的抗原竞争有限的抗体结合位点。这就产生了抗原浓度和底物周转率之间的反比关系。竞争性EIA通常使用一种针对小分子量抗原的抗体，通常小于10000道尔顿。在孵化过程中，抗原含量高的样品导致未标记抗原的结合量大于结合抗原。当向分析中添加显色底物以显色时，抗原浓度高的样品产生的信号低于抗原浓度低的样品，从而在样品中的抗原浓度与分析中的显色之间产生负相关。这种关系可用于从标准曲线推断未知样本中的抗原浓度。这种反应是为数不多的用于小分子量抗原（如类固醇、药物、脂质和肽）的方法之一。

左图：夹心ELISA实验：

将样品加入到包裹有捕获抗体的容器中，并孵育清洗微孔以去除未结合的分子添加检测抗体并孵育以与抗原结合，形成“三明治”清除多余的检测抗体加入二级抗体酶结合物并清洗。结合酶通常是辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）

注：如果报告酶直接与检测抗体结合，则可省略该步骤添加底物并孵育以产生信号读板器中的测量信号。

右图：竞争ELISA实验：

将样品加入到涂有抗物种抗体的容器中酶结合抗原加入样品中，将捕获抗体加入培养皿中并孵育。样本中的抗原和酶结合抗原竞争与捕获抗体的结合。包被在孔中的抗物种抗体结合捕获抗体。清洗微孔以去除多余的抗体和酶结合抗原，添加基板以产生信号读板器中的测量信号。