Kamiya丨Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA说明书

Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA预期用途：

该试剂盒是一种夹心酶免疫分析法，用于体外定量测定小鼠bTC血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解物和其他生物液体。仅供研究使用。

存储：

所有试剂应按照小瓶上的标签保存。校准器、检测试剂A、检测试剂B和96孔带板应在收到后储存在-20°C，而其他试剂温度应为4°C。未使用的板条应保存在密封袋中，并提供干燥剂尽量减少接触潮湿空气。打开的测试试剂盒将在1个月内保持稳定，前提是将其储存为如上所述。

Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA试验原理：

该试剂盒中提供的微孔板已预先涂有bTC特异性抗体。校准器或然后将样品加入到适当的微孔板孔中，加入生物素缀合的抗体bTC。接下来，将与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的阿维丁添加到每个微孔板孔中培养。加入TMB底物溶液后，仅含有bTC、生物素缀合物的孔抗体和酶结合的Avidin将呈现颜色变化。酶底物反应是通过加入硫酸溶液终止，并测量颜色变化在450nm±10nm的波长下进行分光光度测定。样品中bTC的浓度为然后通过将样品的外径与校准曲线进行比较来确定。

Kamiya艾美捷小鼠脱细胞素ELISA试剂制备：

使用前，将所有套件组件和样品置于室温（18-25°C）。如果不使用该套件一次性用完，请只取出本次实验的试纸和试剂，剩下的在所需条件下使用试纸条和试剂。

校准器：

用1.0 mL校准品稀释剂重新配制校准品，在室温下保持10分钟，轻轻摇动（不要起泡）。储备溶液中校准品的浓度为20000 pg/mL。请首先将储备溶液稀释至1000 pg/mL，稀释后的校准品为最高值校准器（1000 pg/mL）。然后准备7支含有0.5 mL校准稀释剂的试管，并使用稀释的校准器，以根据下图所示的图片产生双稀释系列。混合每根管子在下一次转移之前彻底清除。设置7个稀释校准器点，250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL，31.2 pg/mL和15.6 pg/mL，以及最后一支带校准仪的EP管稀释剂为空白，为0 pg/mL。

注：

1.测定前15分钟内准备校准品。请不要在37°C下溶解试剂

2.不允许直接在井中进行连续稀释。

3.避免起泡并轻轻混合，直到晶体完全溶解。最小化由于移液引起的不精确性，使用小容量，并确保移液器经过校准。它是建议吸移一次超过10µL。

4.重组校准品、检测试剂A和检测试剂B只能使用一旦

5.如果洗涤液浓缩液（30X）中已形成晶体，则加热至室温并混合直到晶体完全溶解。

6.受污染的水或试剂制备容器会影响检测结果。

样品制备：

1.Kamiya只负责试剂盒本身，但不负责化验过程中消耗的样品。这个用户应计算整个测试中可能使用的样本量。请保留提前提供足够的样品。

2.分析前请预测浓度。如果这些值不在校准曲线，用户必须为其特定实验确定最佳样品稀释度。

3.血清/血浆样品需要约5倍稀释。建议5倍稀释为40µL样品+160µL PBS。样品应用0.01 mol/L PBS（PH=7.0-7.2）稀释。

4.如果手册中未指明样品，则进行初步实验以确定套件是必要的。

5.通过化学裂解缓冲液制备的组织或细胞提取样品可能导致意外的ELISA由于某些化学品的影响而产生的结果。

6.由于来自其他来源的抗原和我们试剂盒中使用的抗体之间可能不匹配（例如，抗体靶向构象表位而非线性表位），一些天然或重组Kamiya的产品可能无法识别来自其他制造商的蛋白质。

7.受细胞活力、细胞数量或采样时间等因素的影响试剂盒可能检测不到培养上清液。

8.建议在试验中使用未经长时间储存的新鲜样品。否则，蛋白质这些样品可能发生降解和变性，最终导致错误的结果。