巨噬细胞RAW264.7培养要点

巨噬细胞属免疫细胞，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象，RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）是科学实验中常用到的细胞系，其来源为雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。

细胞名称：小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

细胞别称：RAW264; RAW2647; RAW264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; Raw264.7

产品货号：TCM-C766

细胞形态：不规则圆形

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1% Sodium Pyruvate+1%P/S

RAW264.7细胞培养注意要点

➊ 在细胞生长的初始阶段，细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足”延伸。随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度，会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中，镜下观察会同时出现悬浮和贴壁两种形态。

➋ 该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时，吸走部分培养液，留下少许培养液（例如使用T25培养瓶留下2 ml），用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，充分吹打后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内，混匀后进行培养。

➌ 该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。

➍ 血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化，建议选用高质量的胎牛血清。

RAW264.7培养中出现长触角的情况分析

➊ 仅从细胞形态上，并不能判断小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）是否分化，应以相关分子标记物的变化作为依据。

➋ 根据ATCC官网信息（https://www.atcc.org/products/tib-71），RAW264.7的细胞类型为：巨噬细胞，形态描述为：单核细胞/巨噬细胞。参考ATCC提供的细胞照片，该细胞在正常培养状态时确实会呈现出圆形和带触角的纺锤形或立方形两种形态。

➌ 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）在高密度时，圆形细胞的比例相对会高一些。

RAW264.7细胞常见问题解决办法

1. 复苏后存活率不高

  原 因： RAW264.7细胞不同生长密度下细胞形态不同，若复苏密度太高，细胞增殖过快，会加剧细胞的营养缺失，加速细胞老化；若复苏密度太低，细胞生长缓慢。

  解决办法： 直径10cm的培养皿复苏细胞，细胞数量控制在1.0×10^6~1.5×10^6个。

2. 细胞形态发生变异

  原 因： RAW264.7细胞的培养环境恶劣或吞噬过多抗原后会促使该细胞呈现梭形、长梭形，形态发生变化。

  解决办法： 改善细胞培养环境，例如与细胞接触的器皿保证无菌，使用质量较高的胎牛血清。

3. 不同形态细胞消化时间不等

  原 因： 细胞老化后，形态发生变化，细胞伪足变得多且长，这使得这种形态的细胞变得较难消化，使用胰酶长时间消化又会对细胞产生较大损伤。

  解决办法： 可在正常时间终止消化，收集大部分正常状态的细胞，再加入新的胰酶继续消化，而伪足过多过长的细胞，即使加胰酶消化10min及以上也是难以消化下来的，勉强消化下来，对后续的实验数据也会产生较大影响，即没必要每次传代都收集全部细胞，已经发生分化的细胞无需保留要及时丢弃。

4. 细胞生长速度缓慢

  原 因： 传代时汇合度过低会导致细胞生长缓慢，甚至难以贴壁，或是细胞发生了支原体污染。

  解决办法： 定期传代，控制好传代比例，汇合度不可过低。及时进行支原体检测，如发现污染，即刻使用支原体去除试剂进行清除。