Metallothionein-1 as a biomarker of altered redox metabolism in hepatocellular carcinoma cells ex...

本文选自mol  can，2016年，喜欢的可以自行下载阅读

摘要：背景:索拉非尼，一种对各种实体肿瘤有活性的激酶抑制剂，在一些癌细胞中诱导氧化应激和铁死亡，一种新的氧化坏死形式。缺乏反映索拉非尼对癌细胞氧化还原代谢影响的临床适用生物标志物。方法:我们使用基因表达微阵列、实时聚合酶链反应、免疫印迹、蛋白特异性酶联免疫吸附试验和编码荧光素酶的基因报告构建体来研究一组癌细胞对索拉非尼的反应。还使用了从外科肝细胞癌(HCC)样品制备的肿瘤外植体和从接受索拉非尼的HCC患者获得的血清样品。结果:我们观察到金属硫蛋白-1(MT1)家族的基因在HCC细胞系Huh7中被诱导。索拉非尼增加了一组人类癌细胞中MT1G mRNA的表达，这种作用在其他八种临床认可的激酶抑制剂中没有观察到。我们确定了索拉非尼诱导含有抗氧化反应元件(ARE)的133个碱基对区域的转录因子MT1G promoter的最小区域，并显示了转录因子NRF2(核因子红系2相关因子2)的重要作用。我们通过分析从外科HCC标本MT1G的调节来检验我们的发现的临床相关性。最后，我们发现接受索拉非尼治疗的一些HCC患者血清中MT1蛋白水平升高，并发现与总生存率降低有关。结论:这些发现表明MT1构成了适于探索索拉非尼对癌细胞氧化还原代谢的影响的生物标志物。

为什么要做MT1，就是别的文章介绍了MT1参与氧化应激防御体系，索拉非尼也诱导了氧化应激，作者就想检测两者之间有没有相关性。

首先作者检验了索拉非尼刺激下MT1家族表达情况，然后在多个细胞系中检测MT1G在索拉非尼刺激下的表达情况，最后在多种激酶抑制剂中观察MT1G的升高是否是索拉非尼特有的表现。

zinc是专门诱导MT1G的。

一下都是作者验证索拉非尼诱导铁死亡机制的研究了。看明白了吗，铁死亡诱导，抑制铁死亡，阳性对照。这个图作者为了说明一个问题，因为索拉非尼是激酶抑制剂，诱导细胞凋亡、坏死和铁死亡，作者想要说明的是其实是索拉非尼诱导细胞铁死亡才导致的MT1G的升高。

因为MT1G的表达增多，作者看了她的启动子区域转录因子结合情况，发现转录因子结合位点主要在1-133这个位置。这种构建方法真是新奇，我知道的都是1-500,500-1000,1000-1500等等这种构建方法。

紧接着作者就找能结合这个地方的转录因子，就找到了这个NRF2,然后就敲减后看看转录情况，作者就认定了NRF2是通过与MT1G启动子区结合促进转录的。？？？？？？这么草率吗？？？？

然后，作者神来之笔，做了MT1G的基因功能，在索拉非尼存在的条件下，敲减MT1G并没有改变索拉非尼的致死性结局，说明MT1G只是索拉非尼致死的结局性事假，并不是影响索拉菲尼作用的因素。记得以前读过一篇nature 的文章，说的是一个道理，如果一个因素能够作为生物学标志，首先不应该影响药物的作用。

然后，看看了MT1与总体预后相关，并且，应用索拉非尼后MT1升高，与计量无关。

这就完了，好吧！！！！果然还是那个5分的水平