第一天课程总结-黄辉英

一.采样准备：

a.采样人员应熟悉动物防疫的有关法律规定，具有一定的专业技术知识。

b.熟练掌握采样工作程序和采样操作技术。

c.采样人员不得少于2人。

二.动物血液采集：

1.采血过程应严格保持无菌操作。

2.采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥无菌。

3.在采血、分离血清过程中，应避免溶血。

三.样品送检（三要素）：

1.采样记录

2.样品的包装（三层）、编号

3.样品的保存、运送

四.样品采集和检测中注意的生物安全要求

（1）1.穿戴防护用品顺序：戴口罩——戴帽子——穿防护服——戴防护眼镜——穿鞋套或胶鞋——戴手套

2.脱掉防护服用品顺序：

摘下防护眼镜——脱掉防护服——摘下手套——脱掉帽子——脱掉鞋套或胶鞋——摘下口罩

（2）样品检测：

1.人员的防护（头套、白大褂、口罩、手套、实验室专用鞋）

2.样品处理环节：样品接收、开箱、处理后的余样、废弃物、器械、生物安全柜的消毒。

3.核酸提取、反应液配置环节

手套的更换（至少3次）

样品处理（1双）

核酸提取（1双）

试剂的配制（1双）

4.废弃物处理（高压蒸汽灭菌法）

五.样品的保存和运输

1.密封、低温（24小时内，4℃快运；24小时以上冷冻）（用于细菌检测的样品不能冷冻）

2.防破碎；附简要说明：样品背景信息、需要出具的报告单位、送样人及联系方式等

3.接收流程：样品接收、登记——样品的对接——检测信息确认

4.样品的制备：

a.新鲜组织样品

b.血液样品

c.其他样品

d.生物安全注意事项

4.样品的留样

有些样品需按各自储存要求存放，出报告15天后可以处理可视情况进行留存

对于细菌检测的新鲜组织，检测室检测完毕后检测人员可集中消毒处理，不进行留样备份。

六.禽病常见实验室检测方法介绍、检测方案制定及结果分析

赵老师的课程理论知识性较强，加上实际工作中较少接触到，在这里不做总结。

七.非洲猪瘟核酸检测原理、操作和全流程质控要点：

1.流程：临床判断——采样——运输——制样——核酸提取——体系配制——核酸扩增——结果分析——解决方案

2.非瘟发病特点主要表现——出血热

3.潜伏期4-19天或更长（不确定）——与毒株、宿主、感染方式有关

4.荧光PCR检测原理：温变反应、指数扩增、染料显示

5.扩增步骤：变性、退火、延伸

6.荧光PCR是：

a.利用荧光信号的变化实时检测，PCR扩增反应中每一个循环增产物量的变化

b.通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析

7.荧光定量PCR操作

核酸检测操作五字诀：温、混、纯、准、稳

温：控温  环境温度18-26℃，试剂/试剂盒回温充分

混：混匀  充分融化，涡旋混匀，瞬时离心

纯：提纯  样品预处理：针对不同的样品进行处理    核酸提取与纯化

准：精准  微量移液器 ：校准

                  体系配制：准确

                  仪器设备：升降温精准

稳：稳定  环境稳定  人员稳定  设备稳定

八.ELISA(酶联免疫吸附技术)

1.包括：固相载体、包被抗原或抗体、酶结合物、酶作用底物

2.类型分为：

测定抗原：双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法

测定抗体：间接法、双抗原夹心法、竞争法、捕获法

九.病毒血凝实验原理：

病毒能使红细胞发生凝集的特性称为病毒的血凝特性

具有红细胞凝集特性的病毒称为血凝性病毒。如：禽流感病毒、鸡新城疫病毒、鸡产蛋下降综合症病毒等。

十.1%红细胞悬液配制：

1.吸取1ml柠檬酸钠液，采集2-6月SPF公鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液（抗凝剂与血液比例1：4）

2.加入2倍以上体积的PBS溶液，轻轻上下颠倒数次混匀1500r/min离心5min

3.弃去上清液和红细胞上层的白细胞膜，重复步骤2次，第四次2000r/min离心10min

4.弃上清液，吸取离心管底部红细胞1ml加入事先准备的99mlPBS，即成1%红细胞悬液。

十一.药敏实验（纸片扩散法）

操作流程：1.抗生素选择

                    2.培养基选择及制备

                    3.菌悬液制备

                      4.平板涂布

                      5.贴药敏片与培养

                      6.结果观察及制定

十二.总结：以上内容总结为今天所学，自己能够吸收得了的知识点，也是我们服务站日常检测所涉及到的内容点。有的老师授课内容没有在此次总结中体现，考虑到时间太晚，明天还有实操课，培训完结后再做一次体统的总结。

感谢各位老师！