细胞培养—细胞成团如何处理？

细胞成团的原因有哪些？

1.消化的过程过于粗暴，吹打太用力，消化过久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。

2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。

3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。

4、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长得太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

5、传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。

6、非震荡培养或细菌（胞）量过多的话就会成团。

图为SH-SY5Y细胞

如何避免细胞成团的现象？

首先确认当前细胞生长密度及状态，80%左右的生长密度即可进行传代，此时细胞状态较好，且用于传代的数量也足够。

传代操作前，使用缓冲液对细胞进行适当且全面地润洗，清除死亡的细胞团和部分堆叠杂质(在选择适当胰酶浓度时，对于不同代数的不同细胞系需进行一定的调整，如：部分贴壁牢固的细胞应将胰酶分装后，进行预热处理;细胞密度过高时，应该向胰酶中加入少量缓冲液，缓慢均匀地消化细胞等。对于贴壁格外牢固的细胞，可以尝试多次分批进行消化，最大限度保证细胞状态)。

在消化过程中，需均匀慢速晃动培养器皿，以免局部胰酶浓度过高而影响传代。切勿用力摇动，导致边缘松动的大片细胞直接脱落，从而增加细胞成团几率。培养器皿的选择也需注意，部分实验室会使用玻璃培养瓶，因细胞贴壁在玻璃底更容易分离。同时玻璃材质的亲水性和塑料有区别，而且玻璃细胞培养瓶都是实验室内部处理，可能会有清洁残留，在一定程度上抑制细胞的贴壁生长，并且更容易消化，细胞之间的连接比贴壁还要紧密，聚团几率很大。

另外，避免传代过程中汇合度较大，本身1:3甚至1:4都可以正常培养的细胞被1:2传代，会导致母代细胞浓度过高，在分化过程中出现堆叠现象

适当的处理和设备使用，也可以减少成团。如果使用离心机分离或混合样品，将其设置为正确的速度可以减少聚团，通常情况下，较快的速度可以离心散细胞，但在高速下也必须考虑细胞的脆弱性。

细胞成团了，如何处理？

1.如果细胞抱团不影响生长就没问题，只是计数时较麻烦。在消化时，可在细胞由多角形变成圆型之前，用手轻磕培养瓶的侧壁，使细胞从壁上脱落（最好不要吹打，对细胞形状和生长都不好）。 

2.如果感觉有死细胞的DNA，在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse()（1mg/ml溶于水）将DNA链打断。轻柔地吹打细胞，防止对细胞膜造成物理损伤。

3.如果细胞抱团是肉眼可见的，可让细胞静置半分钟左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，目前还没有特别好的分离方法，只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。