Edman降解蛋白测序法的基本步骤解析：耦合和裂解过程

Edman降解法耦合过程

 

Figure 1.多肽的Edman降解蛋白N端测序

异硫氰酸苯酯（PITC）在多肽链的N端与a-氨基（或在脯氨酰残基带有亚氨基的情况下）进行反应，形成末端残基的苯硫代氨基甲酰基衍生物。Edman降解法最初使用吡啶来生成pH值为8.6的碱性环境，后来用的的替代品包括“Quadrol”、三甲胺和N-甲基哌啶。然而Edman降解法需要游离的α-氨基，如果氨基已经被修饰将不能与PITC反应，那么该多肽就相当于是“封闭的”（例如，许多蛋白质就被乙酰基、甲酰基或焦谷氨酰基团封闭）。例如，微量的非离子型洗涤剂即会引起末端封闭。另外，肽本身可能根本不具有N端：如环状天然肽，环孢菌素。在没有游离N端的情况下，必须通过化学或酶促方法切割多肽以产生具有游离N端的片段。需要注意避免样品被含胺的非肽类物质（如trizma碱）污染，因为这些物质也可能与PITC反应并生成干扰后续分析的产物。PITC还会与水和一些难以在反应中被完全排除的其他分子发生反应，因此试验中总会发现一些副产物，例如二苯硫脲。尽量减少副反应有助于提高化学反应和后续分析的效率。与过去的手动测序法相比，自动测序法的优势之一就是可以做到这一点。

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