谈谈怎样做好实验设计

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今天提供一套小分文章的实验套路，基于纯细胞和分子生物学的药理学研究。

1.首先使用时间或是浓度梯度的药物处理细胞，这里的细胞最好有两种，一种是细胞系一种是原代细胞，这样减少永生化细胞对结果的影响。然后观察不同浓度和时间处理条件下的细胞活性，这里的活性检测可以使用台盼蓝拒染实验和LDH毒性试验；

2.随后，要使用CCK8排除细胞增殖对结果的影响，因为随着药物处理时间的延长，细胞数量必然会干扰试验结果，因此需要通过判断细胞的生长周期，来确认最佳的处理浓度和处理时间。

3.确认时间和浓度后，观察细胞的功能学改变，这里就需要涉及到研究的目的了，例如肿瘤迁移？干细胞分化？细胞增殖？细胞凋亡等，不同的功能实验取决于你的实验本身目的。在这一步中，通常要设计定量和定性研究，例如细胞增殖，需要判断细胞增殖的比例、以及细胞增殖周期中的蛋白表达变化。

4.最后一步，机制研究，机制研究主要有三点：通路研究、蛋白相互作用研究和基因转录前后的研究。可以选择其中一点来做，也可以三者都做。研究的方法包括western blot、qPCR、免疫荧光、免疫组化、Co-IP、测序、ChIP、ELISA等传统实验方法。通过机制研究，来解释药物作用对细胞功能学改变的途径。由此形成典型的三步：(1)药物模型的建立(2)功能改变的探究 (3)机制的发现。

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