流感病毒如何提取

流感病毒提取可以用BIOG拭子RNA磁珠法提取

操作步骤

1. 请自行准备：无水乙醇、异丙醇、生理盐水、1.5mL去RNA酶离心管。

2. 取出洗涤液，按70%比例加入无水乙醇，如9mL加入21mL无水乙醇，18mL加入42mL无水乙醇，混匀。

3. 样本处理：a) 拭子：向1.5mL去RNA酶离心管中加入800μL生理盐水，将拭子收集的样本置于生理盐水中，涮洗20秒，使细胞完全脱落，贴离心管壁挤干拭子上的液体，12,000 rpm 离心5 min，弃700 μL上清，剩余100μL上清，充分振荡混匀15秒。

            b) 痰液：向收集的痰液中加入4倍体积1M NaOH，室温放置30分钟，每10分钟振荡混匀一次（如痰液仍粘稠，可适当延长液化时间），12,000 rpm离心5 min，弃上清，剩余100μL上清，充分振荡混匀15秒。

4. 加入200μL 裂解液、20μL 消化液和4μL Carrier，振荡混匀，56℃温育10 分钟。

5. 冷却到室温，加入300μL异丙醇，充分混匀，再加入20μL磁珠复合液（每次使用前须充分混匀），振荡混匀3min（注意不要颠倒混匀，以防磁珠粘附于管盖内壁），静置2min。

6. 将离心管置于磁力架上放置约20s至磁珠完全吸附，开盖，彻底吸弃上清液（注意枪头不要接触磁珠）。

7. 加入600μL配制后的洗涤液，将离心管从磁力架上取下，充分振荡2min，确保磁珠完全分散。将离心管置于磁力架上放置约20s至磁珠完全吸附，开盖，彻底吸弃上清液（注意枪头不要接触磁珠）。

8. 将离心管从磁力架上取下，开盖，干燥约3-5min，至无明显乙醇气味。

9. 加入50 μL洗脱液，振荡至磁珠充分散开，室温静置2min，振荡混匀1min。

10. 将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附后，小心吸取上清液至一新的1.5mL去RNA酶离心管中，提取的核酸可直接用于下游实验，或-70℃保存备用。

注意事项：

1. 为防BIOGRNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水。提取的RNA溶液可适当加入RNA保护因子（货号：51090，一般50μLRNA溶液加入2μL。）

2.  裂解液含有刺激性化学物质，操作过程请做好防护措施，避免直接接触皮肤，防止吸入口鼻，洗涤液在使用前应加入乙醇后充分混匀。

3.  如进行较多样本的批量提取，为节约时间，可先将裂解液、消化液、Carrier加入每一只离心管，混匀，再加入处理后的样本。