基因敲除gene knockout

简称KO，是一种生物体的其中部分基因不起作用的技术。也叫做敲除生物体或者仅仅劣汰。它们用于学习已知序列，不知功能的基因，调查基因缺失的影响。研究人员对敲除生物体和正常生物的不同得出结论。

方法

基因敲除融合各种技术。最初，源自自然界发生突变。之后，基因敲除或者失活通过DNA序列或者其他方法建立。KO直接的创造源自质粒，一种细菌的人造的染色体或者其他DNA序列，继续复制细胞培养。单个细胞基因上DNA结构被转染。通常目标是创造一种有可替代基因的转基因动物。这样做胚胎干细胞基因上变形并植入早期胚胎。造成动物在其胚胎基因的改变，也传递敲除的基因给子代。

为了创造敲除基因的苔藓，原生质体的转染是一种优选的方法。这种变形的苔藓原生质体直接再生成肥沃的苔藓植物。转染8周后，可以通过PCR扫描植物的基因靶点。

结构设计来重组目标基因，这是通过来自基因本身不合适的序列移植入宿主来实现的。然后重组发生在基因序列的一段区域里，造成外来序列的插入，破坏了基因。当序列被打断时，在大多苔藓中的替代基因将会被植入非功能区，如果被移植后。有条件的基因敲除使一种组织或者时间以特定的方式删除基因。这是通过引入基因周围的称作loxP的一段短序列实现的。这些序列将会通过相同的叫做基因敲除的机制引入胚系。这种胚系之后与另一种胚系杂交形成了移植物，这是病毒的酶识别了序列并重组了它们，删除了被这些序列夹击的基因。

因为基因重组的目标类型在大多数细胞和结构里是罕见的事件，目标的外来序列通常包括报告基因插入。这使在细胞和个体中成功的敲除变得简单。有时DNA结构植入染色体没有预期的与目的基因同源的重组。为了消除这种细胞，DNA结构通常包括DNA的第二序列来识别和消除这种细胞。

在二倍体组织中，大多数基因都包括两个等位基因，可能还包括几个相关的基因以同样的方式合作，当每种目标基因被敲除时，会发生几轮额外的转染和选择。选择的品种可能用来产生纯合子敲除动物。