甲基化

DNA甲基化位点三种不同的motif类型(CG,CHG,CHH),已经有很多研究表明在个体内的调控机理和功能并不相同。

DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鸟嘌呤(7-mG)。

结构基因含有很多CPG结构, 2CPG 和2GPC 中两个胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且两个甲基集团在DNA 双链大沟中呈特定三维结构。基因组中60%~ 90% 的CPG 都被甲基化, 未甲基化的CPG 成簇地组成CPG 岛, 位于结构基因启动子的核心序列和转录起始点。有实验证明超甲基化阻遏转录的进行。

In genetics, a sequence motif is a nucleotide or amino-acid sequence pattern that is widespread and has, or is conjectured to have, a biological significance.

In plants and other organisms, DNA methylation is found in three different sequence contexts: CG (or CpG), CHG or CHH (where H correspond to A,T or C). In mammals however, DNA methylation is almost exclusively found in CpG dinucleotides, with the cytosines on both strand being usually methylated.
植物和其他器官?,DNA甲基化在三种不同的序列context发现: CG (or CpG), CHG or CHH。
哺乳动物,基本只发现CpG。cytosines on both strand 被甲基化。

CpG islands are usually defined as regions with 1) a length greater than 200bp, 2) a G+C content greater than 50%, 3) a ratio of observed to expected CpG greater than 0.6,
CpG岛:长度大于200bp,GC含量大于0.5,expected CpG比率大于0.6

在细菌基因组中,N6-甲基腺嘌呤(m6A)和N4-甲基胞嘧啶(m4C)也很常见,它们作为限制修饰(RM)系统的一部分而行使功能

http://www.novogene.com/tech/suppor/news/1480.html

甲基化_第1张图片
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甲基化_第2张图片
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甲基化_第3张图片
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1:目前pacibio的测序仪器可以分析的甲基化类型有:5mc\4mc和6mA,一般原核会提供甲基化位点相对应的motif,真核生物就没有了(一般只关心cpG 岛的甲基化)

甲基化_第4张图片
三代单分子测序对于碱基甲基化修饰分析

2:5mc的监测难度比较大,需要较高的测序覆盖度一般要到250X,但是加入Tet1试剂后,大概就需要25X就可以了

3:pacbio测序仪器集成了http://rebase.neb.com/rebase/rebase.html一个关于甲基化转移酶的识别motif数据库,motif是甲基化位点左右12bp的一段序列

4:检测原理:当该位点有碱基修饰的时候,测序速度会变慢,其实其它种类的剪辑修饰也可以检测,只是三代公司还没有算出检测算法。

5:因为真核不分析motif,所以在分析的时候,三代的protocal是不一样的:

真核:RS_Modification_Detection

原核:RS_Modification_and_Motif_Analysis.1

参考:

1:https://github.com/PacificBiosciences/SMRT-Analysis/wiki/SMRT-Pipe-Reference-Guidev2.3.0#PRO_MOD

2:pacbio官方文档

3.博客笔记

4.诺和细菌完成图甲基化检测

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